激光扫描共聚焦显微镜对马拉色菌等真菌自发荧光的生物学特性研究

发布时间：2020-09-29 12:29

　　目的：①研究临床常见致病真菌马拉色菌、念珠菌、丝状菌等在紫外光照射下的自发荧光特性；②探讨真菌在酸碱性环境中、存活和死亡状态下自发荧光质和量的变化规律；③建立真菌自发荧光检测、记录的最佳条件；④探讨通过检测真菌的自发荧光进行真菌病早期、快速诊断的可行性。方法：选用糠秕马拉色菌和日本马拉色菌2株标准菌，接种在Dixon培养基32℃培养，分别在培养的第2、4、6、8、10天挑取菌落放在TCS-SP2型激光扫描共聚焦显微镜(Leica TCS-SP2 LSCM)下观察、测定其自发荧光；分别用3％戊二醛溶液、pH4.0盐酸溶液、10％氢氧化钾溶液、1280μg／mL和64μg／mL氟康唑溶液、0.3％美蓝溶液处理后观察马拉色菌自发荧光的变化；选择白念珠菌、申克孢子丝菌、红色毛癣菌、断发毛癣菌、土曲霉、烟曲霉等用沙堡葡萄糖琼脂培养后观察其自发荧光的特点。结果：糠秕马拉色菌和日本马拉色菌2株标准株的自发荧光强度分别在培养第4和8天时最强，菌落的自发荧光在1小时内逐渐减弱；3％戊二醛溶液、pH4.0盐酸溶液、1280μg／mL和64μg／mL氟康唑溶液、3％美蓝溶液处理后马拉色菌自发荧光都增强，10％氢氧化钾溶液中的马拉色菌在开始时荧光增强，2天后减弱；白念珠菌、申克孢子丝菌、红色毛癣菌、断发毛癣菌、土曲霉、烟曲霉等在培养条件下有自发荧光，但都较马拉色菌弱。结论：①不同菌属、不同菌株的自发荧光不相同；②同一菌株在相同培养条件下不同时间自发荧光不同；③弱酸性和弱碱性环境可使马拉色菌的自发荧光增强，10％氢氧化钾溶液可使马拉色菌的自发荧光在开始时增强，2天后减弱；④真菌的自发荧光与菌体的存活与否没有关系；⑤白念珠菌、申克孢子丝菌、红色毛癣菌、断发毛癣菌、土曲霉、烟曲霉等具有自发荧光，强度较马拉色菌弱；⑥丝状菌的孢子比菌丝的自发荧光强。
【学位单位】：四川大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2007
【中图分类】：R756
【部分图文】：

荧光图像,自发荧光,发荧光,可见光

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自发荧光,马拉色菌,酸溶液,菌体

1小时内荧光均有所增强，表现为自发荧光弱的菌体、同一菌体内自发荧光弱的部分逐渐增强，本来自发荧光强的菌体也有所增强。其中pH4.O盐酸溶液的菌悬液增强最明显(图8，余略)。第2、5、10、20天时以1帧/30秒钟的扫描速度对同一视野连续扫描5分种。取同时间的生理盐水菌悬液及各菌悬液处理当时的自发荧光强度作参照，pH4.0盐酸溶液、0.3%碱性美蓝溶液处理过马拉色菌的荧光强度均有增强，10%氢氧化钾溶液处理当时自发荧光增强，之后荧光变弱(图9)。3%戊二醛溶液、1280林留mL和64林留mL氟康哇溶液均可以使马拉色菌抱子的自发荧光增强(图10)。2.马拉色菌经处理后自发荧光强度:马拉色菌经过上述方法处理当时及处理后2、5、10、20天的荧光强度应用 LeicaTCS一 SPZLSCM软件测量，计算各观察时间点马拉色菌自发荧光强度的平均值(表4)，绘制自发荧光的变化趋势(图11)。

氧化钾,马拉色菌,美蓝,盐酸

图g糠桃马拉色菌CBS1878(Dixon士高养基32℃培养，原始放大倍数x600)经A‘声}尹}‘盐水)、B(pH4刃盐酸)、C(03%碱性美蓝)、D(10%氖氧化钾溶液)处理后O、2、5、10、2()天[}、jl‘]发荧光变化特点。

【参考文献】