皮肤恶性黑色素瘤中RUNX3基因甲基化的研究

发布时间：2020-10-23 19:57

　　 目的研究皮肤恶性黑色素瘤中RUNX3基因启动子区CpG岛甲基化与其基因表达的关系,探讨RUNX3基因甲基化在皮肤恶性黑色素瘤发病机制中的作用。 方法采用半定量PCR(RT-PCR)检测人恶性黑色素瘤细胞株A375中的RUNX3基因mRNA转录水平、甲基化特异性多聚酶链反应(MSP)检测其启动子区CpG岛的甲基化状态、Western Blot检测其蛋白表达情况;比较经不同浓度去甲基化药物5—杂氮胞苷(5—azac)(0μmol/l,1μmol/l,5μmol/l,10μmol/l,20μmol/l)处理A375细胞后,RUNX3基因mRNA的表达水平、启动子区CpG岛的甲基化状态及蛋白表达情况的差异,并用MTT法观察5—杂氮胞苷对细胞增殖的影响。 结果在人恶性黑色素瘤细胞株A375中,去甲基化药物5—杂氮胞苷处理前,RUNX3基因表达缺失,处于失活状态,且该基因启动子区呈高甲基化状态。但经不同浓度5—杂氮胞苷处理细胞后,失活的RUNX3基因得以重新激活,mRNA不同程度恢复转录,蛋白亦出现不同程度的表达,且高甲基化的RUNX3基因启动子区发生不同程度去甲基化。MTT示5—杂氮胞苷(5-azac)可在一定程度上抑制A375肿瘤细胞的生长和增殖。 结论皮肤恶性黑色素瘤中RUNX3基因的失活可能与其启动子区高甲基化有关,并可能在恶性黑色素瘤的发病机制中起着一定的作用。
【学位单位】：中南大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2008
【中图分类】：R739.5
【部分图文】：

RIJNX3mRNA在未用药组细胞中未见表达，经l林moFI、5林moUI、10”moUI、20拜m。功的不同浓度5一azac处理后可见 RUNX3mRNA表达，且随着浓度的增加表达逐渐增强(见图3一3，3一4)。Markero5A图 1020(林moFI) Marker0151020(林moFI)B图图3一 3RT一PCR分析皮肤黑色素瘤细胞株A375经5一azac干预前后目的基因RUNX3和内参照p一 actinmRNA的表达A图所示是干预1d的;B图所示是干预3d的 M:DNAMarker，O:未经干预的皮肤黑色素瘤细胞株A375p一aetin内参照(550bp)，RUNX3:目的片段(404bp)

RIJNX3mRNA在未用药组细胞中未见表达，经l林moFI、5林moUI、10”moUI、20拜m。功的不同浓度5一azac处理后可见 RUNX3mRNA表达，且随着浓度的增加表达逐渐增强(见图3一3，3一4)。Markero5A图 1020(林moFI) Marker0151020(林moFI)B图图3一 3RT一PCR分析皮肤黑色素瘤细胞株A375经5一azac干预前后目的基因RUNX3和内参照p一 actinmRNA的表达A图所示是干预1d的;B图所示是干预3d的 M:DNAMarker，O:未经干预的皮肤黑色素瘤细胞株A375p一aetin内参照(550bp)，RUNX3:目的片段(404bp)

A375细胞中RUNX3基因启动子区是甲基化的，经l林mol/l、5林moFI、10林moUI、20林mo扒不同浓度5一azac处理后甲基化和非甲基化共存，说明部分发生了去甲基化(见图3一5)。 opM1pM MMUMU 5pMMU 1opM20pMMU MUH20翎知翔仰M opM1pM MUMU 1opMMU20pMMUHZO姗期期仰F图图3一 5MSP示皮肤恶性黑色素瘤细胞株A375经不同浓度5一azac干预前后RUNX3基因启动子甲基化状态E图所示是干预1d的;F图所示是干预3d的M:甲基化引物扩增后产物(132bp)U:非甲基化引物扩增后产物(138bp)0刚:未干预1网:1恤01/15一azaes幽:5阳01/15一azae10刚:10腼01/15一 azae20刚:20腼01/15一azae M:DNAMarkerH20:阴性对照2.45一杂氮胞昔处理前后人恶性黑色素瘤细胞株A375细胞中RUNx3蛋白表达情况 westemBlot结果示A375细胞中RUNX3蛋白在处理前无表达，经1”mo功、5料moUI、10卜mo叭、20林moFI不同浓度5一azac处理后可见RUNX3蛋白出现不同程度的表达，且随着处理药物浓度的增加表达逐渐增强。(见图3一6，3一7)
【共引文献】

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本文编号：2853475