TLR9在HaCaT细胞UVB光老化模型中对下游信号分子的调控作用

发布时间：2020-10-23 20:54

　　 目的:探讨Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)在中波紫外线(ultraviolet B,UVB)诱导的人永生化角质形成细胞(human immortal keratinocyte,HaCaT)光老化模型中对下游信号分子的调控作用。方法:实验分为3组:正常对照组、模型组、A151组。正常对照组予以假照射处理,模型组予以辐照剂量30 m J/cm~2 UVB照射处理,A151组予以辐照剂量30 m J/cm~2 UVB照射并加用TLR9抑制剂进行干预处理。使用衰老相关β半乳糖苷酶法观察细胞衰老。CCK-8法检测细胞增殖。Western blot检测TLR9、磷酸化核转录因子(phospho nucler factor-κB,pNF-κB)蛋白表达。RT-PCR法检测细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)mRNA转录水平。结果:Western blot结果显示模型组较正常对照组TLR9、pNF-κB蛋白表达量升高(P=0.000,P=0.000),A151组较模型组TLR9、pNF-κB蛋白表达量降低(P=0.010,P=0.000)。RTPCR结果显示模型组较正常对照组TNF-α、IL-6mRNA转录水平上调(P=0.000,P=0.000),A151组较模型组TNF-αmRNA、IL-6 mRNA转录水平下调(P=0.000,P=0.030)。衰老相关β半乳糖苷酶染色结果显示模型组较正常对照组染色阳性细胞数增多(P=0.000),A151组较模型组染色阳性细胞数减少(P=0.000)。CCK-8结果显示模型组较正常对照组细胞增殖率降低(P=0.010),A151组较模型组细胞增殖率升高(P=0.045)。结论:UVB通过上调HaCaT中的TLR9表达,引起核转录因子磷酸化,促进细胞因子TNF-ɑ、IL-6转录水平升高,介导细胞炎性反应,从而降低细胞增殖率,诱导细胞衰老。
【文章目录】：
1 材料和方法
    1.1 主要试剂和仪器
    1.2 方法
        1.2.1 细胞培养
        1.2.2 模型建立及干预
        1.2.3 衰老相关β半乳糖苷酶法检测细胞衰老
        1.2.4 CCK-8法检测细胞增殖率
        1.2.5 Western blot法检测TLR9、p NF-κB的蛋白水平
        1.2.6 PCR检测TNF-α、IL-6的m RNA转录水平
    1.3 统计学分析
2 结果
    2.1 各组衰老相关β半乳糖苷酶检测结果
    2.2 CCK-8检测细胞增殖率
    2.3 各组细胞TLR9及p NF-κB蛋白表达水平检测结果
    2.4 各组细胞TNF-α、IL-6的m RNA转录水平检测
3 讨论

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本文编号：2853529