BAG-1在皮肤黑素瘤的表达及其对黑素瘤细胞生物学行为影响的体外研究

发布时间：2020-12-09 01:41

　　恶性黑素瘤是一种高度恶性的黑素细胞肿瘤,皮肤是其主要累及部位之一。皮肤恶性黑素瘤的发病率逐年增加,其死亡例数占所有皮肤肿瘤的80%。BAG-1是一种多功能蛋白,在多种肿瘤的发生、发展及放、化疗治疗反应中有重要的生物学作用。但BAG-1蛋白在皮肤黑素瘤组织中的表达情况及其临床意义尚未见报道,BAG-1在黑素瘤发生、发展中的具体作用及其机制更不清楚。目的探讨BAG-1在皮肤黑素瘤的表达及其与临床病理特征的相关性;RNAi抑制BAG-1基因表达,研究其对小鼠黑素瘤B16F10细胞株的细胞周期、增殖、凋亡及多西紫杉醇治疗反应的影响。材料与方法第一部分:免疫组化检测BAG-1、p53、Bcl-2在皮肤恶性黑素瘤、色素痣、正常人皮肤的表达,结合患者临床资料（性别、年龄、Clark分级等）进行分析;检测BAG-1在黑素瘤细胞株M14和B16F10细胞的表达。第二部分:以pRNAT-U6.1/Neo为载体,构建重组shRNA质粒pRNAT-U6.1/Neo-BAG-1-1、-2、-3,酶切及PCR测序鉴定;利用lipofectamin^TM 2000将重组质粒转染小鼠黑素瘤B16F... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

一a:阴性表达;图3一b:

BAG-1在人黑素瘤细胞株M14阳性表达(DAB显1

限制性内切酶BamHI、Hindlll酶切位点，报告基因eGFp及neom邪in、Ampieillin抗性标记(图l)。质粒大小为6380bP，设计编码shRNA的DNA序列为74bP。重组质粒扩增后，BamHI酶切重组质粒，2%琼脂糖凝胶电泳可见条带位于6000一8000bP之间(图2)。PCR测序证实目的基因正确插入，序列与设计的序列相同(图3)。三P亡tH一‘几义︸8卜尸咬众的ee:劝件亡觅T7p行川自r.曰”日I柳尸faI制川日e日旧，.门旧加厅旧r骊le--补~cc~。~。GcT~~T以了。口“出泣‘边趁纽姜习到洒“代口，l图1:质粒载体pRNAI’ -u6.1入co骨架图图2:重组质粒BamHI酶切电泳，条带位于6000一 8000bp之间，边缘清晰。


本文编号：2906030