槲皮素在实验性脑出血大鼠神经功能修复中的作用及机制研究

发布时间：2017-12-20 08:27

  本文关键词：槲皮素在实验性脑出血大鼠神经功能修复中的作用及机制研究　出处：《安徽医科大学》2015年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：研究目的1通过胶原酶法制作SD大鼠脑出血模型,用于研究槲皮素对脑出血大鼠神经功能障碍的影响。2进一步确定槲皮素通过抑制炎症反应、氧化应激、神经元凋亡和促进内源性神经干细胞(neural stem cells, NSCs)增殖分化等多种生物学机制来实现对受损神经功能的修复。为出血性卒中治疗提供新的治疗思路及实验依据。研究方法1胶原酶法制备大鼠脑出血模型(intracerebral haemorrhage, ICH),将实验用大鼠随机分为四组：假手术组、单纯脑出血组、脑出血+槲皮素5 mg/kg组和脑出血+槲皮素50 mg/kg组。除假手术组外,其他大鼠均为脑出血模型。2制备SD大鼠脑出血模型12 h后,脑出血+槲皮素5mg/kg组给予腹腔注射5mg/kg剂量槲皮素；脑出血+槲皮素50mg/kg组给予腹腔注射50mg/kg剂量槲皮素；假手术组和脑出血组术后12h经腹腔注入等量生理盐水。各组每12h给药1次,连续72 h。3在脑出血模型制作成功后的第12 h和72 h参照改良大鼠神经功能缺损评分(modified neurological severity score, mNSS)标准,进行大鼠行为学评分。72 h后处死各组实验大鼠,观察各组脑出血大鼠脑标本的血肿体积、脑水肿、炎症因子表达和细胞凋亡情况。4胶原酶法制作SD大鼠脑出血模型,随机分为3组：假手术组、单纯脑出血组和脑出血+槲皮素5mg/kg组。3组实验动物均于术后12h经腹腔注射BrdU 50mg/kg,1次/d,至各组大鼠处死前一天停止注射。脑出血+槲皮素50mg/kg组术后12h给予腹腔注射50mg/kg剂量槲皮素；假手术组和脑出血组术后12h经腹腔注入等量生理盐水；各组每12h给药1次。在7,14d时观察使用BrdU和Nestin标记的内源性神经干细胞增殖情况。5通过以上实验,进一步设计相关实验观察大鼠脑出血后槲皮素对神经损伤修复的具体机制。结果1在给药的第72 h分别观察各组大鼠神经功能缺损评分,与单纯脑出血组比较,脑出血+槲皮素50mg/kg组大鼠神经功能症状均明显改善,神经功能缺损评分数值明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)。2经干湿重法比较,与单纯脑出血组比较后,脑出血+槲皮素50 mg/kg组可以显著减轻脑出血后脑组织水肿程度,差异具有统计学意义(P0.05)。出血灶体积检测,与脑出血组比较后,脑出血+槲皮素50mg/kg组大鼠出血灶明显收缩,差异具有统计学意义(P0.05)。3与单纯脑出血组相比,脑出血+槲皮素50 mg/kg组大鼠炎症因子的表达明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)；TUNEL法染色结果显示凋亡细胞数目明显减少,差异具有统计学意义(P0.05)；Western Blot结果显示促凋亡蛋白Bax和凋亡蛋白caspase-3蛋白表达量明显降低,差异具有统计学意义(P0.05)；抑制凋亡蛋白Bcl-2蛋白表达量明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)；免疫荧光染色结果显示caspase-3阳性细胞数量明显减少,差异具有统计学意义(P0.05)。4与单纯脑出血组相比,脑出血+槲皮素50 mg/kg组大鼠在脑出血周围区域内源性神经干细胞增殖明显,新生神经干细胞数量明显增多,并能维持较长增殖时间(×400),差异具有统计学意义(P0.05)。结论通过本实验,证明槲皮素可以减轻SD大鼠脑出血后神经受损程度,改善神经功能缺损症状。槲皮素可能是通过抑制炎症反应、氧化应激、神经元凋亡和促进内源性神经干细胞(neural stem cells, NSCs)增殖等多种生物学机制来实现对受损神经功能的修复。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R743.3

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本文编号：1311425