促红细胞生成素通过抑制内质网应激保护神经元和血脑屏障的缺血后损伤

发布时间：2018-02-14 06:15

  本文关键词： 卒中 脑缺血再灌注 内质网应激 细胞凋亡 血脑屏障 神经保护　出处：《辽宁医学院》2014年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的 近年来研究发现，促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）可以对脑缺血组织具有神经保护作用，然而EPO很难通过血脑屏障，需要大剂量全身注射，由此产生严重的副作用限制了缺血性卒中患者的临床应用。因此，本实验建立了一种新的用药策略，，探讨EPO联合tPA（tissue plasminogen activator，tPA）治疗对大鼠脑缺血再灌注（ischemia-reperfusion，I/R）损伤的保护作用以及作用途径和机制，为缺血性卒中防治提供新思路。 方法 选用成年雄性SD（Sprague Dawley）大鼠54只，随机分为假手术组、模型组、EPO组、tPA组、EPO+tPA组、salubrinal组，制备大鼠脑I/R模型，采用大脑中动脉局部注射（middle cerebral artery infusion，MCAI）EPO（800IU/kg）的方法，tPA（10mg/kg）经尾静脉注射，salubrinal提前30min腹腔注射，模型组经MCAI注射相同体积的盐水替代EPO。缺血2h后进行再灌注，再灌注24h对大鼠进行神经行为学评分后处死，TTC（tetrazolium chloride，TTC）染色计算梗死体积、脑水肿比例，Western blot、免疫荧光方法检测脑组织和脑微血管AQP4、caspase-3、紧密连接蛋白（tight junction protein，TJP）claudin-5和occludin以及内质网应激（endoplasmic reticulum stress，ERS）相关蛋白GRP78、ATF6α和CHOP的表达。 结果 1、EPO联合tPA或单独应用EPO减轻大脑I/R损伤：检测脑梗死体积，脑水肿和神经功能缺损评分，与模型组相比，单独应用tPA对I/R损伤没有任何作用；单独应用EPO一定程度上减少了脑梗死体积，减轻了脑水肿和神经功能缺损（P0.05）；EPO联合tPA较单独应用tPA明显减轻I/R后脑梗死体积，脑水肿和神经功能缺损（P0.05）。 2、EPO联合tPA或单独应用EPO减少I/R后AQP-4、caspase-3及ERS相关蛋白表达：Western-blot检测AQP4和caspase-3表达结果显示，模型组和单独应用tPA的AQP4和caspase-3表达水平在I/R损伤后24h明显升高（P0.05），而EPO联合tPA或单独应用EPO明显降低了AQP4和caspase-3的表达（P0.05）。Western-blot检测GRP78和CHOP的表达结果显示，I/R后模型组和单独应用tPA的GRP78和CHOP表达明显增高（P0.05），而EPO联合tPA治疗或单独应用EPO明显降低了GRP78和CHOP表达（P0.05）。 3、EPO联合tPA或单独应用EPO减少I/R后大脑微血管内紧密蛋白降解：Western-blot结果显示I/R后模型组和单独应用tPA的大脑微血管中Claudin-5和Occludin表达明显减少（P0.05），而EPO联合tPA或单独应用EPO明显抑制了Claudin-5和Occludin表达降低（P0.05），免疫荧光染色结果显示模型组和单独应用tPA的Claudin-5和Occludin在内皮细胞上的表达明显减少，而EPO联合tPA或单独应用EPO明显减少了Claudin-5和Occludin的降解。 4、EPO联合tPA或单独应用EPO抑制I/R后大脑微血管的ERS：Western-blot检测大脑微血管内GRP78和CHOP的表达结果显示，I/R后模型组和单独应用tPA中的GRP78和CHOP的表达明显增高（P0.05），而EPO联合tPA或单独应用EPO较tPA组明显降低了GRP78和CHOP的表达（P0.05）。 5、EPO联合tPA或单独应用EPO抑制脑组织和大脑微血管的ERS信号通路：Western-blot检测脑组织和大脑微血管的ERS通路中CHOP上游蛋白ATF6α的表达，结果显示在两种组织中I/R后模型组和单独应用tPA中的ATF6α的表达明显增高（P0.05），而EPO联合tPA或单独应用EPO明显降低了ATF6α表达（P0.05）。 结论 1、EPO联合tPA治疗对大脑I/R后损伤具有神经保护作用。 2、EPO联合tPA治疗可以减少大脑I/R后的凋亡并减轻血脑屏障破坏。 3、ERS信号通路ATF6α-CHOP的抑制可能参与了EPO联合tPA治疗保护作用机制。
[Abstract]:Purpose In recent years , it has been found that erythropoietin ( EPO ) may have neuroprotection effect on cerebral ischemia . However , it is difficult for EPO to pass through the blood brain barrier , requiring a large dose of systemic injection , thereby causing serious side effects to limit the clinical application of ischemic stroke patients . method 鏂规硶

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本文编号：1510063