应用PCR和DNA微列阵对肌营养不良的综合诊断分析

发布时间：2019-11-18 11:00

【摘要】：肌营养不良是一类肌细胞本身病变导致的单基因遗传性肌肉疾病，其临床症状和发病原因具有高度异质性，特点是进行性肌无力和萎缩，可以通过常染色体隐性、常染色体显性或X连锁隐性的方式遗传。根据疾病表现症状和发病时间，肌营养不良被分为八大类型：假肥大型肌营养不良、肢带型肌营养不良、面肩胛肱型肌营养不良、远端型肌营养不良、强直性肌营养不良、先天型肌营养不良、埃默里氏肌营养不良、眼咽型肌营养不良，其中假肥大型肌营养不良最为常见。目前，肌营养不良的临床诊断主要是根据疾病症状、家族史，并辅以血常规检测、电生理检测、骨骼肌核磁共振及肌活检检测。肌营养不良的临床表现复杂多变。同一类型肌营养不良的临床症状可能存在较大差异，如LGMD2I型轻度症状，患者发病时间为6~23岁，类似于贝克氏肌营养不良；LGMD2I重度症状，患者10岁之前发病，之后失去行走能力。不同类型肌营养不良的临床症状之间也可能存在病征交叉，如DYSF基因突变可造成肢带型肌营养不良和三好氏远端肌营养不良，疾病均表现为多于青春期前后发病，进程缓慢，，近远端骨骼肌明显受累，用传统方法进行临床分型诊断有较大难度。这些都增加了肌营养不良的临床诊断难度，是肌营养不良诊治研究的瓶颈。随着肌营养不良相关基因的定位及功能研究，肌营养不良发病分子机理被逐渐阐释。对肌营养不良相关基因的检测分析能有助于肌营养不良的精确临床诊治、遗传咨询和产前诊断。本课题我们采用多重PCR、实时荧光定量PCR、DNA微列阵的基因检测分析方法，对五大类型肌营养不良的34个相关基因进行了较全面的检测分析。首先通过多重PCR法对假肥大型肌营养不良相关基因DMD的26个热缺失突变外显子进行缺失性检测。再使用实时荧光定量PCR法对假肥大型患者的女性亲属进行相应外显子的相对定量分析，判断女性受检者的基因突变携带状况。最后，使用DNA微列阵的方法对34个肌营养不良相关基因的507个突变位点进行检测分析，覆盖了假肥大型、肢带型、远端型、先天型、EDMD型这五大类型42种亚型的肌营养不良。通过这一基因检测体系，我们对五大类型肌营养不良的34个相关基因进行一次性筛查检测，以弥补肌营养不良基因检测的空白领域。论文同时梳理分析了肌营养不良致病分子机理，为基于发病机理的肌营养不良新型分类方法做铺垫。
【学位授予单位】：天津大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R746.2

【参考文献】