纳米载体SWCNT投递Bcl-2 siRNA促进U251细胞凋亡
【图文】：
，mitotracker标记线粒体用于定位。如图3，结果显示对照组（control）中无红色荧光，siRNA组和SWCNT-siRNA组中有红色荧光。在后两组中，发现SWCNT-siRNA组的荧光强度明细强于siRNA组。结果表明，siRNA被成功投递进入U251细胞，SWCNT-siRNA比siRNA的投递效率明显高。图2不同浓度（siRNA0，50,100,150,200nmol/L）SWCNT-siRNA处理U251细胞12h（A）和24h（B）后活性分析Fig.2CellviabilityofU251cellsincubatedwithSWCNT-siRNAatdifferentconcentrations(siRNA0，50,100,150,200nmol/L)for12h(A)andanadditional48h(B)图1动态光散射分析SWCNT-siRNA复合物Fig.1DynamiclightscatteringmeasurementofSWCNT-siRNAcomplex2.4荧光PCR分析结果为进一步证明抑制Bcl-2的表达，是通过进入细胞的siRNA发挥作用的。采用荧光PCR分析siRNA、SWCNT-siRNA处理细胞24h后Bcl-2mRNA含量与对照组做比较，如图4。统计结果显示，siRNA、SWCNT-siRNA与对照组比较均有统计学差异（P<0.05），SWCNT-siRNA与siRNA相比有统计学差异（P=0.00），SWCNT-siRNA组约70%mRNA被降解掉，说明本研究的设计的siRNA载体的投递效率较高。2.5U251胶质瘤细胞凋亡结果本实验采用AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒，通过流式细胞仪分析U251细胞的凋亡情况。细胞分别与siRNA和SWCNT-siRNA共培养12h后，换上新鲜培养基再培养48h，收集细胞按照试剂盒的说明书上的方法处理细胞，用流式细胞仪分析，结果如图。在图5中，早期凋亡细胞分布右下象限中，SWCNT-siRNA处理细胞后凋亡细胞比例从8.27%增加到42.23%；晚期死亡细胞分布在右上象限中,SWCNT-siRNA与对照组比较没有显著差异。实验重复3次。经统计分析，发现与对照组比较，SWCNT-siRNA组中的活细胞及早期凋亡细胞所占的比
中国临床解剖学杂志2017年第35卷第5期L。结果用统计图表示，如图2。各实验组中细胞的存活率均为90%上，与对照组比较无统计学差异（P>0.01）。因此，SWCNT-siRNA具有低毒性，在小于200nmol/L和48h内，可以安全使用。2.3细胞摄取siRNA实验实验设计3组，分别为对照组（control）、siRNA、和SWCNT-siRNA，其中各组中siRNA的浓度为100nmol/L与细胞处理12h，并用DAPI标记细胞核，mitotracker标记线粒体用于定位。如图3，结果显示对照组（control）中无红色荧光，siRNA组和SWCNT-siRNA组中有红色荧光。在后两组中，发现SWCNT-siRNA组的荧光强度明细强于siRNA组。结果表明，siRNA被成功投递进入U251细胞，SWCNT-siRNA比siRNA的投递效率明显高。图2不同浓度（siRNA0，50,100,150,200nmol/L）SWCNT-siRNA处理U251细胞12h（A）和24h（B）后活性分析Fig.2CellviabilityofU251cellsincubatedwithSWCNT-siRNAatdifferentconcentrations(siRNA0，50,100,150,200nmol/L)for12h(A)andanadditional48h(B)图1动态光散射分析SWCNT-siRNA复合物Fig.1DynamiclightscatteringmeasurementofSWCNT-siRNAcomplex2.4荧光PCR分析结果为进一步证明抑制Bcl-2的表达，是通过进入细胞的siRNA发挥作用的。采用荧光PCR分析siRNA、SWCNT-siRNA处理细胞24h后Bcl-2mRNA含量与对照组做比较，，如图4。统计结果显示，siRNA、SWCNT-siRNA与对照组比较均有统计学差异（P<0.05），SWCNT-siRNA与siRNA相比有统计学差异（P=0.00），SWCNT-siRNA组约70%mRNA被降解掉，说明本研究的设计的siRNA载体的投递效率较高。2.5U251胶质瘤细胞凋亡结果本实验采用AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒，通过流式细胞仪分析U251细胞的凋亡情况。细胞分别与siRNA和SWCNT-siRNA共培养12h后
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