建立帕金森病细胞模型筛选具有神经元保护活性的小分子化合物

发布时间：2019-12-06 13:54

【摘要】：目的：LUHMES细胞可以被分化成为有丝分裂后细胞，并且在生化性质、细胞形态和功能等各方面都与多巴胺能神经元相类似。为了发现在治疗帕金森病方面具有神经元保护作用的化合物，我们建立了以分化后LUHMES细胞为基础，模拟多巴胺能神经元退行性变的模型。 方法：LUHMES细胞在cAMP和GDNF的作用下分化。用MPP+或携带有α-synuclein蛋白过表达基因的baculovirus病毒处理分化后的LUHMES细胞，诱导细胞产生与多巴胺能神经元退行性变相似的细胞毒性。细胞的ATP水平以及caspase3/7的活性作为评价细胞毒的指标。CDK2抑制剂GW8510和GSK3β抑制剂SB216763作为文献报道的化合物处理细胞，考察其对MPP+和α-synuclein诱导的细胞毒的缓解作用。 结果：分化过程中，LUHMES细胞逐渐能够表达多种多巴胺能神经元特有的标志物，，生长出延长的突起并成为有丝分裂后细胞，与神经元相似。MPP+能够剂量依赖性地降低分化后的细胞ATP水平并升高caspase3/7的活性。两种化合物（GW8510和SB216763）均能够缓解MPP+诱导的细胞毒，且EC50分别为12nmol/L和205nmol/L。α-synuclein蛋白过表达同样能够有效降低细胞ATP水平及升高Caspase3/7活性，但其产生的细胞毒只能被GW8510有效缓解，SB216763作用不明显。 结论：我们建立了两种帕金森病相关的细胞毒模型，并使用文献报道的化合物分别对两种模型进行了验证。为探寻或筛选治疗帕金森病方面具有神经元保护作用的化合物，相比于需要高技术要求及规模有限的原代多巴胺能神经元，分化后的LUHMES细胞将提供一种优良的平台。
【图文】：

MPTP/MPP+的作用机制[23]

图 1-2 6-OHDA 的作用机制[24]Fig. 1-2 Mechanism of 6-OHDA藤酮：鱼藤酮（rotenone）是从鱼藤属植物中提取出的一种具有杀虫活
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R742.5

【共引文献】

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本文编号：2570407