α-硫辛酸通过FBXL5-IRP2通路干预帕金森病模型铁代谢的分子机制研究

发布时间：2020-03-19 15:27

【摘要】：目的:观察α-硫辛酸(α-LA)对帕金森病(PD)模型大鼠中脑黑质(SN)和PD细胞模型的铁含量、氧化应激水平、以及FBXL5、铁调节蛋白2(IRP2)、膜铁转运蛋白1(FP1)表达的变化,探讨α-LA干预PD铁代谢的分子机制。方法:(1)动物实验:将健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=15)、PD模型组(n=15)和α-LA治疗组(n=15);利用APO诱导的旋转试验和圆筒试验检测PD大鼠的行为学变化评估α-LA疗效;采用免疫组化检测PD大鼠中脑右侧SN酪氨酸羟化酶(TH)的表达情况;采用普鲁士蓝铁染色法和双吡啶法检测大鼠中脑右侧SN铁含量;采用分光光度法和WST-1法分别检测大鼠中脑右侧SN谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力;采用Western blot检测各组大鼠右侧SN区域FBXL5、IRP2和FP1的表达情况。(2)细胞实验:采用6-OHDA诱导PC12细胞建立帕金森病细胞模型,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性筛选最佳6-OHDA建模浓度和α-LA干预治疗浓度,细胞实验分为3个组,即正常对照组、模型组(200μmol/L 6-OHDA)和α-LA干预组(10μmol/Lα-LA+200μmol/L6-OHDA);采用双吡啶法检测细胞内铁含量;采用比色法检测细胞内丙二醛(MDA)含量,荧光探针2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色法检测细胞内活性氧(ROS)含量;采用Western blot检测各组PC12细胞内FBXL5、IRP2和FP1的表达情况。结果:(1)动物实验结果:与假手术组大鼠相比,PD模型组大鼠经APO诱导后的旋转速度显著增加(P0.01),圆筒试验检测的左上肢使用率显著下降(P0.01),PD模型组大鼠中脑右侧SN的TH表达显著减少(P0.01),铁染色阳性细胞数量和总铁含量均显著增加(P0.01,P0.01),FBXL5表达明显减少(P0.01),IRP2表达明显增多(P0.01),FP1表达明显减少(P0.01),GSH含量和SOD活力显著降低(P0.01,P0.01);与PD模型组大鼠相比,α-LA治疗组大鼠经APO诱导后的旋转速度明显下降(P0.01),左上肢使用率明显升高(P0.01),α-LA治疗组大鼠中脑右侧SN的TH表达明显回升(P0.01),铁染色阳性细胞数量和总铁含量均明显减少(P0.01,P0.01),FBXL5表达明显增多(P0.05),IRP2表达明显减少(P0.01),FP1表达明显增多(P0.05),GSH含量和SOD活力明显增加(P0.05,P0.01)。(2)细胞实验结果:200μmol/L的6-OHDA处理PC12细胞24 h后细胞活力下降至65.05±5.61%,作为PD模型细胞处理;而经10μmol/Lα-LA预处理1 h后再加入200μmol/L 6-OHDA共孵育24 h,PC12细胞的细胞活力升至87.79±3.76%,此作为α-LA干预组细胞处理。与正常对照组PC12细胞相比,模型组PC12细胞活力显著降低(P0.01),铁含量明显增多(P0.01),FBXL5表达明显减少(P0.01),IRP2表达明显增多(P0.01),FP1表达明显减少(P0.01),MDA和ROS含量显著增加(P0.01,P0.01);与模型组PC12细胞相比,α-LA干预组细胞活力明显回升(P0.01),铁含量明显减少(P0.01),FBXL5表达明显增多(P0.01),IRP2表达明显减少(P0.05),FP1表达明显增多(P0.05),MDA和ROS含量明显降低(P0.01,P0.01)。结论:(1)α-LA可能通过FBXL5-IRP2通路上调FP1增加铁转出,抑制PD模型铁沉积。(2)α-LA通过抗氧化作用上调PD模型FBXL5蛋白表达水平。
【图文】：

验结果诱导 PC12 细胞选取最佳建模建模浓度究[37-38]以及本课题组前期的前期研究结果[26诱导建模的处理时间。PC12 细胞被不同浓度呈剂量依赖性降低（图 2-7）。用 6-OHDA要求细胞损伤程度适中（细胞损伤过重造成不利于观察药物的干预效果），当 6-OHD为 65.05±5.61 %（P<0. 01），符合实验所需A 浓度作为 PD 细胞模型建模浓度。
【学位授予单位】：贵州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R742.5

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本文编号：2590401