IL-17对胶质瘤细胞增殖和迁移能力的影响及其分子机制的研究

发布时间：2020-03-23 22:17

【摘要】：【目的】白细胞介素17(Interlukin-17,IL-17)作为一种促炎细胞因子,目前已被发现在胶质瘤病人的肿瘤组织和血清中高表达,但是IL-17对胶质瘤增殖和迁移的影响还尚不清楚。本文主要研究IL-17对胶质瘤细胞增殖和迁移能力的影响及其潜在的分子机制。【方法】(1)流式细胞术检测胶质瘤细胞系SHG-44细胞和U373细胞表面IL-17受体的表达;使用EdU试剂盒检测IL-17对SHG-44细胞和U373细胞的增殖能力的影响;克隆形成实验和划痕实验检测IL-17对两种胶质瘤细胞的增殖和迁移的影响;体内实验验证IL-17对胶质瘤细胞成瘤能力的影响:将50 ng/mL浓度的IL-17孵育15min的SHG-44细胞和未经处理的SHG-44细胞注射入裸鼠背部皮下(n=6),每隔一段时间记录一次各瘤体的体积,3周后取下瘤体称重。(2)抗体芯片检测IL-17刺激状态下SHG-44细胞内的信号分子的变化;Western blot验证抗体芯片结果并检测其他被激活的相应信号分子。(3)将SHG-44细胞和U373细胞分为抑制剂组和小干扰RNA组,即DMSO组、50ng/mL IL-17处理组、IL-17+LY294002组、IL-17+Perifosine组、IL-17+BAY11-7082组和对照组、IL-17+siCTR组、IL-17+siPI3K组、IL-17+siAkt1组、IL-17+siP65组。Western blot验证两组细胞中各信号分子的上下游关系;克隆形成实验和划痕实验检测抑制剂组细胞的增殖及迁移能力的变化;将抑制剂组SHG-44细胞注射如裸鼠背部皮下(n=8),每隔一段时间记录一次各瘤体的体积,3周后取下瘤体称重。【结果】(1)流式细胞术检测到SHG-44细胞和U373细胞表面均有IL-17受体表达;EdU实验和克隆形成实验结果显示IL-17可以显著促进SHG-44细胞和U373细胞的增殖能力;划痕实验结果显示IL-17可以促进胶质瘤细胞的迁移能力;体内实验证实IL-17能够促进裸鼠体内胶质瘤细胞的成瘤能力。(2)抗体芯片结果显示IL-17刺激可以使胶质瘤细胞Akt1的磷酸化水平升高,Western blot还检测到IL-17刺激状态下的胶质瘤细胞内NF-κB-p65磷酸化水平上升。(3)PI3K/Akt1位于NF-κB-p65的上游;EdU实验、克隆形成实验结果证实IL-17是通过PI3K/Akt1/NF-κB-p65通路诱导胶质瘤细胞增殖和迁移;体内实验结果表明IL-17是通过PI3K/Akt1/NF-κB-p65通路诱导胶质瘤细胞肿瘤形成。【结论】(1)IL-17可以促进胶质瘤细胞的增殖和迁移。(2)IL-17通过激活PI3K/Akt1/NF-κB-p65信号通路诱导胶质瘤细胞增殖和迁移。
【图文】：

（3） 三周后处死裸鼠取下瘤体称重。2.2.10 统计学分析采用 SPSS11.5 软件进行分析，计量资料用 mean±SD 表示， 用 Studentt 检验， P＜0.05 为差异有统计学意义。2.3 实验结果2.3.1 胶质瘤细胞表面 IL-17R 的表达流式细胞术检测两种胶质瘤细胞系SHG-44细胞和U373细胞表面IL-17R的表达情况。ISO 组细胞使用 PE-labeled isotype mouse IgG2a 4℃孵育，IL-17R 组使用 PE-labeledanti-humanIL-17RA4℃孵育。结果显示两种胶质瘤细胞表面均有IL-17R 的表达（图 2.1）。A B

Figure 3.2. The effects on siRNAs or inhibitors on PI3K, Akt1 and NF-κB-p65 expression andactivation in SHG-44 cells in response to IL-17.图 3.2：siRNA 或抑制剂对 IL-17 刺激状态下的 SHG-44 细胞内 PI3K、Akt1 和 NF-κB-p65表达及活化的影响。SHG-44 cells were transfected with siPI3K, siAkt1, sip65 or siCTR (A), or treated with 10μM ofLY294002, Perifosine or BAY11-7082 (B), and then incubated with IL-17 for 15 and 30 min. Thelevels of p-Akt1 (Ser473), p-Akt1 (Thr308), t-Akt1 and β-actin at 15 min as well as p-p65, t-p65and β-actin at 30 min were detected by Western blot. Results from one representative experimentout of three were shown. Data were represented as means ± SD (n=3 in each group). ** P<0.01 vs.siCTR + IL-17 group, or DMSO + IL-17 group.转染 siPI3K、siAkt1、sip65 或 siCTR(A)，或 10μM 浓度的 LY294002、Perifosine 或 BAY11-7082(B) 处理 SHG-44 细胞，，然后加入 50ng/mL 浓度的 IL-17 共同孵育 15min 和 30min。我们使用 Western blot 检测 15min 时间点 p-Akt1 (Ser473)、p-Akt1 (Thr308)、t-Akt1 和 β-actin
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.4

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本文编号：2597346