脑膜炎分型诊断中潜在相关蛋白鉴定的研究

发布时间：2020-03-30 21:50

【摘要】：脑膜炎是一种常见的中枢神经系统感染性疾病,其主要类型有结核性脑膜炎、化脓性脑膜炎、病毒性脑膜炎。其中,化脓性脑膜炎及结核性脑膜炎预后较差,需要及早诊断,及时合理治疗。然而,早期脑膜炎缺乏特异性临床表现,脑脊液生化指标及影像学表现也没有典型特征。神经感染性疾病确诊的依据在于从脑实质或脑脊液内检测到病原生物的存在,但传统病原微生物检测方法耗时长,且阳性率并不多,早期脑膜炎的分型诊断极为困难。因此,需要找到一种快速且特异性高的脑膜炎分型诊断方法。目的应用液相色谱-串联质谱技术(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)对已有表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)找出的脑膜炎分型诊断树中m/z=2176.205,m/z=3399.302的蛋白进行鉴定。方法选取62例脑脊液中m/z=2176.205,m/z=3399.302含量均高的脑脊液6组,采用液相色谱-双压线性离子阱高分辨率组合型质谱仪(LC-LTQ Orbitrap Velos)对样品进行检测,使用MZmine v2.27对质谱数据进行可视化。使用Mascot v2.3.02对蛋白质进行鉴定。然后用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)对所得蛋白质进行对比检验。结果应用液相色谱-串联质谱技术鉴定出m/z=2176.205为泛素羧基末端水解酶1(UCHL1),m/z=3399.302为巨噬细胞移动抑制因子(MIF),经过ELISA验证,支持m/z=3399.302为MIF,不支持m/z=2176.205为UCHL1。结论质核比为3399.302的蛋白质为MIF,且在化脓性脑膜炎患者中升高,完善了脑膜炎分型诊断树。
【图文】：

模型图,脑膜炎,模型,实验资料

第 3 章实验资料与方法第 3 章实验资料与方法3.1 前期工作利用 62 例脑膜炎患者，其中包括化脓性脑膜炎 16 例、结核性脑膜炎病毒性脑膜炎 28 例。采用 SELDI-TOF-MS 技术对 62 例脑脊液样本进行得到全部可识别的差异蛋白峰共 129 个，，通过软件分析得到有统计学差峰共 40 个，利用 m/z=2176.205、m/z=2326.05、m/z=2436.154、m/z=33m/z=4125.172、m/z=8927.867、m/z=14675.06 七个显著差异表达的蛋白脑膜炎分类决策树（图 3.1.1），并给出各组中七个差异蛋白的平均含量（[42]。现选取 m/z=2176.205、m/z=3399.302 的蛋白进行鉴定，进一步明确类型。

谱图解析,二级,解析图,红色

图 4.2 UCHL1 肽段二级谱图解析2)M/Z=3399.302Macrophage migration inhibitory factor肽段解析图如下（图 4.3）MIF_HUMAN Score: 57Macrophage migration inhibitory factor OS=Homo sapiens GN=MIF PE=1 SV=4Nominal mass (Mr): 12639; Calculated pI value: 7.74Sequence Coverage: 19%红色部分为相匹配肽段1 MPMFIVNTNV PRASVPDGFL SELTQQLAQA TGKPPQYIAVHVVPDQLMAF51 GGSSEPCALC SLHSIGKIGG AQNRSYSKLL CGLLAERLRI
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R742.9

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