抑制GLUT1表达对神经母细胞瘤细胞糖代谢和生物学行为影响的研究

发布时间：2020-03-31 01:14

【摘要】：目的本研究利用人神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)细胞系SHSY5Y,研究抑制葡萄糖转运蛋白1(Glucose transporter 1,GLUT1)的表达对肿瘤细胞糖酵解水平、增殖和侵袭迁移能力等生物学行为的影响。方法用GLUT1特异性小分子抑制剂WZB117处理人神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y,实时荧光定量PCR检测GLUT1 mRNA水平表达,Western blotting在蛋白水平检测GLUT1、糖酵解相关酶、周期蛋白的表达,CCK-8法检测细胞增殖能力,ATP试剂盒检测ATP含量变化,LDH试剂盒检测LDH含量变化,流式细胞技术检测细胞周期、凋亡情况,Transwell侵袭、迁移实验分别检测细胞侵袭、迁移能力。结果1.随着WZB117处理浓度增大,SH-SY5Y细胞增殖呈下降趋势,10μmol/L时增殖抑制最明显,15和30μmol/L时,细胞死亡较多,故选择10μmol/L作为抑制浓度。2.WZB117(10μmol/L)处理SHSY5Y细胞24 h后,GLUT1 mRNA水平表达开始增高,72 h时表达降低;处理24h后开始出现GLUT1蛋白水平表达明显降低。3.WZB117(10μmol/L)分别处理SH-SY5Y细胞12、24、48、72 h,随着处理时间的延长,ATP含量和LDH含量呈下降趋势。4.WZB117(10μmol/L)处理SH-SY5Y细胞24 h后,己糖激酶(HK2),丙酮酸激酶(PKM2),磷酸果糖激酶(PFKL)蛋白水平表达下降。5.WZB117(10μmol/L)处理SH-SY5Y细胞24 h后,观察到细胞周期G0-G1期阻滞,SH-SY5Y细胞出现明显的坏死而非凋亡。细胞周期蛋白(Cyclin E2)、周期蛋白依赖性激酶(CDK2)与视网膜母细胞瘤基因pRb蛋白水平表达均降低,抑癌基因P53蛋白水平表达增高。6.WZB117(10μmol/L)处理SHSY5Y细胞24 h后,Transwell侵袭、迁移实验显示细胞穿膜数量均明显减少。结论WZB117抑制GLUT1的表达降低糖酵解水平,抑制NB细胞体外生长,诱导细胞周期阻滞,抑制细胞侵袭、迁移。本研究提示GLUT1可作为NB的潜在治疗靶点。
【图文】：

实时荧光定量PCR,统计学意义,细胞

GLUT1 mRNA 水平明显增高，48 h 后进一步增高，但培养 72 h 后表达降低，差异有统计学意义（图2，P<0.01）。图 2 实时荧光定量 PCR 检测 SH-SY5Y 细胞 GLUT1 mRNA 水平Figure 2. Level of GLUT1 mRNAwas assessed by qRT-PCR*P ≤ 0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001

糖酵解,学位论文,医科大学,细胞

重庆医科大学硕士研究生学位论文3.3 Western blotting 检测 GLUT1 及糖酵解相关酶蛋白表达WZB117 作用于 SH-SY5Y 细胞 24 h 后，GLUT1 蛋白水平表达量显著降低，48h、72h 后蛋白水平表达量进一步降低（图 3A，P＜0.01）。WZB117 作用于 SH-SY5Y 细胞 12 h 后，HK2、PKM2、PFKL 蛋白水平表达量均降低，，24 h 后进一步下降，差异有统计学意义（图 3C，P＜0.001）。A B
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.4

【参考文献】