大鼠毛囊神经嵴干细胞向星形胶质细胞的诱导分化

发布时间：2020-04-09 20:32

【摘要】：研究目的:毛囊神经嵴干细胞(hair follicle neural crest stem cells,hfNCSCs)位于皮肤毛囊的隆突部,属于神经嵴来源的干细胞。由于大部分个体的毛囊分布广泛,所以该细胞的组织来源相对丰富。并且毛囊神经嵴部相对而言易于取材和分离,可以进行大量的、充分的细胞培养。更重要的是,毛囊神经嵴干细胞和其他成体干细胞相比在体内成瘤率较低。毛囊神经嵴干细胞在不同诱导因子的刺激下,可向不同类型的细胞分化。例如:已有研究将该细胞诱导为神经元细胞和平滑肌细胞等,这些诱导而来的细胞不仅表型发生了改变,同时细胞功能也随之发生了改变。将这些诱导而来的细胞移植到动物体内也可发挥相应的作用。毛囊神经嵴干细胞的这些特性在细胞治疗、组织工程、药物研发中成为理想的细胞来源,所以对毛囊干细胞进行深入的生物特性方面的研究具有重要的意义。在中枢神经系统中数量最多的细胞为胶质细胞,其中星形胶质细胞又占有绝大部分,其在中枢神经系统中发挥着重要作用。星形胶质细胞功能障碍可导致许多神经系统方面的疾病。而人们对星形胶质细胞功能的认识大多是通过体外实验获得的,因此,星型胶质细胞的体外培养在研究中起着至关重要的作用。而原代方法获得的星形胶质细胞较易被其他细胞污染,这可能对星形胶质细胞的研究工作产生影响。所以本实验目的是提取大鼠的hfNCSCs,对提取的细胞进行培养和鉴定后,使用特定的诱导培养基诱导其向星形胶质细胞分化,并对诱导而来的星形胶质细胞进行体外功能方面的鉴定。研究方法:(1)采用组织贴块培养法对提取的毛囊神经嵴干细胞进行培养,之后对培养的细胞进行免疫荧光鉴定。(2)对提取并培养的毛囊神经嵴干细胞进行诱导,使其向星形胶质细胞分化,并对分化后的细胞进行免疫荧光染色鉴定。(3)对诱导来的星形胶质细胞进行体外功能方面的检测:对诱导来的星形胶质细胞在促进神经元增殖及突触形成方面的功能进行检测。结果:(1)对大鼠的毛囊神经嵴进行提取并培养出的细胞,其活性较好、形态规则、增殖良好,nestin免疫荧光染色为阳性。(2)对hfNCSCs培养后进行诱导分化,分化后的细胞GFAP免疫荧光染色为阳性,证实其为星形胶质细胞。(3)诱导而来的星形胶质细胞可以促进神经元细胞增殖,并可促进运动神经元的突触形成。结论:(1)组织贴块法提取的毛囊神经嵴可以培养出毛囊神经嵴干细胞。(2)在特定的诱导条件下可诱导毛囊神经嵴干细胞向星形胶质细胞分化。(3)诱导来的星形胶质细胞可以存活、增殖并存在着相应的功能。
【图文】：

毛囊隆突部组织贴块培养４ｄ后可见有少许梭形细胞开始在隆突部爬出，逡逑呈放射状增长。７ｄ观察，细胞进一步增加，排列紧密。传代后可见细胞周围逡逑光晕较强，胞核折光性较高，形态大多为长梭形，有小部分为多角形（图３－１邋）。逡逑ＥＭＭ—ＳＢ泛漏逡逑▲邋＾逡逑参？邋▲逦▲逡逑图３－１毛囊神经嵴培养结果（２０Ｍｍ）逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋３－１邋Ｈａｉｒ邋ｆｏｌｌｉｃｌｅ邋ｎｅｕｒａｌ邋ｃｒｅｓｔ邋ｃｕｌｔｕｒｅ邋ｒｅｓｕｌｔｓ邋（２０邋ｆｘｍ）逡逑ａ为培养四天，毛囊神经嵴干细胞开始爬出；ｂ为培养７ｄ后，毛囊神经嵴干细胞；逡逑ｃ、ｄ为培养１４ｄ后高倍镜下的毛囊神经嵴干细胞，可见细胞形态多为长梭形；ｅ为传代逡逑后的毛囊神经嵴干细胞。逡逑３＿１．２ｈｍＣＳＣｓ邋的鉴定逡逑对培养的ｈｆＮＣＳＣｓ进行Ｎｅｓｔｉｎ免疫荧光细胞化学染色法检测，结果显逡逑示大鼠ｈｆＮＣＳＣｓ的Ｎｅｓｔｉｎ染色为阳性（图３－２）。逡逑２０逡逑

在倒置显微镜下观察细胞形态并拍照。培养至第４天，细胞伸长以梭形逡逑或多角形细胞为主，并有的体积较大。培养１４天后，细胞形态逐渐变得较逡逑单一，呈梭形或星形，胞质丰富，核大，境界清楚，折光度好（图３－３）。逡逑２１逡逑
【学位授予单位】：滨州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R741

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本文编号：2621229