牙龈卟啉单胞菌与颈动脉粥样硬化斑块稳定性相关性分析及机制探索

发布时间：2020-04-09 22:11

【摘要】：背景缺血性脑卒中约20%~30%继发于颈动脉狭窄,其中约90%的颈动脉狭窄是由动脉粥样硬化所致。目前,制定颈动脉狭窄诊疗指南主要依据仍然是颈动脉狭窄程度,但也突出了颈动脉斑块稳定性的重要性。颈动脉斑块稳定性已被证明是颈动脉狭窄症状的危险因素,影响颈动脉狭窄患者脑卒中的风险评估,因而,引起越来越多人们的重视。慢性牙周炎是常见的口腔感染性疾病,可以起颈动脉内中膜增厚,促进斑块生成发展,已被证明是心血管疾病的独立危险因素,但是其与颈动脉斑块稳定性的关系,尚没有得到证实。牙龈卟啉单胞菌是慢性牙周炎的主要致病菌,被越来越多的用来研究慢性牙周炎与心血管疾病的关系。目的通过研究,明确牙龈卟啉单胞菌与颈动脉粥样硬化斑块稳定性的关系,探索其中可能的的途径机制,为临床上合并慢性牙周炎的颈动脉狭窄患者早期口腔干预及脑卒中的筛查提供理论基础。方法分别从临床样本研究和菌群多样性分析两部分明确牙龈卟啉单胞菌对颈动脉粥样硬化斑块稳定性的影响。临床样本研究部分,首先分别对患者颈动脉狭窄症状和斑块稳定性进行危险因素分析,明确慢性牙周炎与颈动脉狭窄症状和斑块稳定性之间的关系;然后将慢性牙周炎与颈动脉斑块稳定性评价指标之间进行相关分析,探索慢性牙周炎影响颈动脉粥样硬化斑块稳定性的途径机制。菌群多样性分析部分主要进行菌群多样性差异分析、差异菌功能预测、细菌验证和基质金属蛋白酶荧光染色,探索牙龈卟啉单胞菌影响颈动脉粥样硬化斑块稳定性的可能通路机制。结果临床样本研究部分:颈动脉狭窄症状Logistic回归分析可见LDL-C、不稳定性斑块和慢性牙周炎是颈动脉狭窄症状的危险因素,活化部分凝血活酶时间是其保护因素,其中LDL-C(OR:3.267,95%CI:1.015-6.502)和慢性牙周炎(OR:2.756,95%CI:1.168-10.515)是颈动脉狭窄症状的独立危险因素。颈动脉斑块稳定性分组中,年龄、高脂血症、LDL-C、D-二聚体、纤维蛋白降解产物、狭窄程度、慢性牙周炎、斑块体积和斑块钙化点数量为颈动脉斑块稳定性的危险因素,其中LDL-C(OR:3.119,95%CI:1.172-8.302)、纤维蛋白降解产物(OR:2.269,95%CI:1.324-3.888)、斑块体积(OR:10.492,95%CI:1.002-109.900)和斑块钙化点数量(OR:6.684,95%CI:1.482-30.138)为颈动脉粥样硬化稳定性的独立危险因素。慢性牙周炎相关分析中,区分计量资料和计数资料,分别采用Kruskal-Wallis H检验和χ~2检验,结果显示患者年龄和斑块纤维帽厚度存在统计学意义。患者围手术期并发症、手术时长、术中出血、术后住院时间以及术后6个月再狭窄率在颈动脉稳定性分组和慢性牙周炎严重程度分组中均未见明显统计学差异。菌群多样性分析部分:属水平上,差异菌种类在不稳定组更多,且相对丰度更高;牙龈卟啉单胞菌所属的卟啉菌属相对丰度在不同稳定性斑块组间存在明显差异;菌群功能预测显示稳定组菌群似乎在脂代谢、异生素生物降解和代谢和氨基酸代谢方面更有优势,而不稳定组菌群则通过增强碳水化合物代谢效率来影响斑块稳定性。PCR结果显示不稳定组颈动脉斑块内牙龈卟啉单胞菌检出率更高(χ2=5.714,p=0.017),而随着慢性牙周炎进展,牙龈卟啉单胞菌检出率明显增加(χ~2=6.682,p=0.035)。免疫荧光染色结果显示基质金属蛋白酶-2、-8和颈动脉平滑肌细胞在慢性牙周炎分组中存在差异,而基质金属蛋白酶-9未见明显差异;基质金属蛋白酶-2、-8和-9可由斑块内巨噬细胞分泌。结论牙龈卟啉单胞菌检出率随慢性牙周炎病情严重程度变化而变化,可被认为是慢性牙周炎影响斑块稳定性的主要细菌。慢性牙周炎与颈动脉斑块稳定性相关,作用机制可能是通过基质金属蛋白酶(MMP-2,-8)影响斑块纤维帽结构,进而影响斑块的稳定性,也可能是通过影响脂质代谢功能起作用,具体机制还有待进一步探索。
【图文】：

正态分布,颈动脉斑块,注F,脂质

图 1 颈动脉斑块组织学特点注 Fibrous cap：纤维帽 Lipid core：脂质核心 Calcification：钙化Intraplaque hemorrhage：斑块内出血 Macrophage foam cells：巨噬细胞泡沫细胞Neovascularity：新生血管（三）数据分析数据使用 SPSS 23.0 进行统计学处理。具有正态分布的连续变量表示为平均值±标准偏差（SD），分类变量表示为数值。使用 Student's t 检验进行连续变量的统计学比较。使用χ2检验或 Fisher 精确检验（如果组中数量为 5 或更小）来分析分类变量。对于正态性检验或方差齐性检验存在显著性差异的计量资料，采用基于秩次的非参数统计方法（Kruskal-Wallis H 检验）进行分析。双侧 p 值＜0.05 设定为统计学显著性。在进行颈动脉狭窄症状相关因素分析时，以症状作为因变量，患者年龄、性别、体重指数、高血压病、糖尿病、冠心病、吸烟及饮酒情况、高脂血症、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、凝血功能、慢性牙周炎严重程度、斑块稳定性和颈动脉狭窄程度作为自变量，分别进行单因素分析，有统计学意义的

影像,慢性牙周炎,斑块,厚度

图 2：慢性牙周炎与纤维帽厚度和斑块体积关系四、讨论颈动脉狭窄症状是颈动脉粥样硬化与斑块稳定性共同作用的结果。动脉粥样化是斑块形成发展的基础，斑块的不稳定倾向是狭窄症状出现的危险因素之一。前斑块稳定性评价方法有影像学技术、生物学指标和组织学鉴定等。常用的影像术包括超声、CTA、MRI、OCT 及 PET 等。生物学指标和颈动脉斑块易损性呈高相关性,主要的指标有 CRP hs-CRP PTX3 IL-6 IL-8 IL-18 YKL-40 及基质金属白酶家族(MMPs) 等各种方法都有一定的优缺点和局限性。当前，组织学方法然是鉴别颈动脉斑块稳定性的“金标准”。我们认为，，颈动脉斑块稳定性在颈动脉窄症状发生发展过程中作用关键，寻找一种简便科学的稳定性鉴别方法，对评估动脉狭窄患者卒中风险，具有重要意义。颈动脉斑块主要病理表现为内皮细胞损伤、炎症细胞浸润、脂质异常沉积、沫细胞形成、粥样斑块形成、钙化、新生血管生成及斑块内破裂出血等[51,52]。脂血症患者脂质代谢异常，是颈动脉斑块稳定性的风险因素。低密度脂蛋白（LD
【学位授予单位】：中国人民解放军海军军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R743.3;R781.42

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