大鼠脑缺血再灌注早期microRNA-124表达变化与细胞焦亡的关系

发布时间：2020-04-10 06:28

【摘要】：目的探讨micro RNA-124在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其对细胞焦亡的调控机制。方法选取8周龄雄性SD大鼠80只,随机分为正常对照组(control组)、假手术组(sham组)、脑缺血再灌注组(分再灌注3、6、12、24小时)、溶剂对照组(NC组)、micro RNA-124激动剂组(ago-mi RNA-124组)、micro RNA-124抑制剂组(antago-mi RNA-124组)、STAT3抑制剂组(S31-201组),每组8只。采用改良Zea-Longa线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。运用HE、TTC染色和神经功能评分法在细胞、组织、行为学水平对脑损伤程度进行评估;运用q RT-PCR技术分析脑组织中micro RNA-124相对表达变化;采用荧光素酶报告基因技术和Western blot技术验证micro RNA-124下游靶基因(STAT3);运用免疫组化和Western blot技术进一步分析脑组织中焦亡相关蛋白Caspase-1、Gasdermin D和促炎因子IL-1β、IL-18的表达及分布。结果1与正常对照组比较,假手术组的神经功能评分、micro RNA-124及细胞焦亡相关蛋白的表达量无明显差异,模型组不同时间点的神经功能评分、micro RNA-124及细胞焦亡相关蛋白前体及活性体的表达量均明显升高(P0.05),其中micro RNA-124的表达量于再灌注后12小时达高峰,24小时下降,Caspase-1、IL-18前体及活性体的表达量在24小时内呈现递增趋势(P0.05),Gasdermin D活性体和IL-1β的前体及活性体的表达量在12小时达高峰,24小时下降。2与溶剂对照组比较,micro RNA-124高表达组的脑梗死面积明显减小(17.37±1.47 vs38.30±3.44,P0.05),神经功能评分明显下降(1.60±0.54 vs 2.40±0.55,P0.05),表达焦亡相关蛋白的阳性细胞数也明显减少,而micro RNA-124抑制剂组的上述指标均明显升高(P0.05)。3荧光素酶报告基因技术中,与阴性对照剂组比较,mi RNA-124+野生型STAT3质粒组细胞中萤光素酶活性明显下降(0.50±0.02 vs 1.00±0.05,P0.05),而micro RNA-124+突变型STAT3质粒组的荧光素酶活性未出现明显变化(0.95±0.03 vs 1.00±0.04,P0.05);Western blot实验结果显示,与溶剂对照组比较,micro RNA-124高表达组STAT3及p-STAT3的表达量均明显下降(0.27±0.02 vs 0.47±0.02;0.38±0.02 vs 0.46±0.03,P0.05),S31-201组焦亡相关蛋白的表达量也明显下降,Caspase-1p20(0.43±0.02 vs0.80±0.03,P0.05)、Gasdermin D活性体(0.34±0.03 vs 0.75±0.03,P0.05)、Activated-IL-1β(0.30±0.03 vs 0.71±0.03,P0.05)、Activated-IL-18(0.27±0.02vs 0.67±0.03,P0.05)。结论micro RNA-124可通过负向调控STAT3降低脑缺血再灌注损伤中细胞焦亡的发生进而发挥神经保护作用,为micro RNA-124应用于临床治疗脑缺血再灌注损伤提供新的靶点。图31幅;表14个;参140篇。
【图文】：

脑组织,HE染色

图 1 模型组脑组织 HE 染色（400×，n=3）Fig.1 HE staining of rat brain tissue in model group6h 12h 24h

功能评分

图 2 模型组大鼠神经功能评分(***P<0.05)Fig.2 Neurological score of model group rats(***P<0.0注损伤早期大鼠脑组织中 miRNA-124 的表达变
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R743

【参考文献】