氧糖剥夺再灌注后miR-181a的神经保护作用及其机制

发布时间：2020-04-26 01:04

【摘要】：目的:探究miR-181a经过氧糖剥夺再灌注后对N2a细胞缺血损伤中的作用。同时,也进一步研究miR-181a对靶蛋白络丝蛋白(Reln)表达水平的调节和对N2a细胞氧糖剥夺再灌注处理后的Smac-IAPs信号通路的影响。方法:选择小鼠N2a细胞为研究对象,用N2a细胞的OGD/R模型还原神经细胞再灌注损伤的过程,将其随机分为5组,依次为正常对照组、氧糖剥夺4小时再灌注各个时间组。用流式细胞仪测凋亡率,实时定量(Real-time)PCR技术测miR-181a表达水平,用免疫印迹法(WB)检测Reln蛋白的表达变化,并用双荧光素酶报告基因共转染检测miR-181a对Reln-3’UTR的直接调控作用。然后,用miR-181a-mimics使miR-181a表达上调,检测各组细胞的凋亡率、miR-181a水平及Reln蛋白水平。再用PCR检测氧糖剥夺再灌注24小时Smac mRNA、XIAP mRNA的表达水平以及用WB检测Reln、Smac、XIAP蛋白表达情况。结果:1.细胞经OGD/R后凋亡率的变化:凋亡率与氧糖剥夺再灌注时间的延长成正比。OGD4h/R0h组,N2a细胞的凋亡率较正常对照组稍有增加,但不明显(P0.05)。OGD4h/R4h组细胞的凋亡率与正常对照组相比较明显升高(P0.01)。细胞再灌注12小时组和24小时组细胞的凋亡更加严重,同正常对照组比较,差异尤为显著(P0.01)。2.miR-181a的表达变化:miR-181a的水平在N2a细胞OGD4h/R后明显降低,且与氧糖剥夺再灌注的时间呈现负相关。OGD4h/R0h组N2a细胞的miR-181a水平较正常对照组对比就有明显下降(P0.01)。OGD4/R4h组miR-181a的水平较之前下降更明显(P0.01),当再灌注的时间进一步延长至12小时组亦或24小时时,miR-181a的水平下降更为显著,与正常对照组比较,差异尤为显著(P0.01)。3.miR-181a过表达组与正常对照组、试剂对照组比较,OGD4h/R24h后细胞的凋亡率明显下降(P0.01)。4.上调miR-181a后,Reln蛋白显著下降。运用双荧光素酶报告基因检测,结果显示miR-181a显著抑制荧光素酶活性(荧光比值为77.3%)。5.miR-181a过表达组较正常对照组、试剂对照组的Smac水平明显下降(P0.01),而XIAP的水平却稍有升高。结论:1.氧糖剥夺再灌注后,miR-181a能减少神经细胞凋亡,可能对神经细胞起保护作用;2.miR-181a在OGD4h/R后通过介导Smac-IAPs凋亡通路,实现神经保护作用。
【图文】：

图 3-1 N2a 细胞 OGD4h/R 不同时间点的形态（×100）A:Normal 组；B：OGD4h/R0h 组；C：OGD4h/R4h 组；D：OGD4h/R12h 组；C：OGD4h/R24h 组糖剥夺再灌注后 N2a 细胞凋亡变化

N2a细胞OGD4h/R后不同时间的凋亡率示意图
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R743

【参考文献】

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本文编号：2640900