LanCL2调控胶质母细胞瘤细胞侵袭的机制研究

发布时间：2020-04-29 22:24

【摘要】：目的:证实Lan CL2可调控胶质母细胞瘤细胞侵袭,阐释Lan CL2的活化机制并鉴定出其相互作用蛋白,为发展新的胶质母细胞瘤治疗方案提供预临床实验基础。方法:利用si RNA干扰胶质母细胞瘤细胞Lan CL2的表达,以及利用CRISPR/Cas9系统构建Lan CL2敲除的胶质母细胞瘤细胞系,通过transwell侵袭实验、3D侵袭实验、侵袭性伪足形成实验、刺端形成实验(barbed end assay)和激光扫描共聚焦技术,分析靶向Lan CL2对侵袭性伪足的形成和活性的影响。另外,通过构建Lan CL2过表达的胶质母细胞瘤细胞系,同样通过transwell侵袭实验、3D侵袭实验、侵袭性伪足形成实验、刺端形成实验和激光扫描共聚焦技术以及磷酸质谱反向证明Lan CL2对胶质母细胞瘤细胞侵袭性的调控作用。结果:Lan CL2基因在27%的胶质母细胞瘤组织中(580例中有154例为阳性结果)存在拷贝数变异和高扩增现象,且检测出高扩增水平Lan CL2的胶质母细胞瘤患者有较短的总生存期;55%的胶质母细胞瘤样本中(31例中有17例阳性结果),Lan CL2蛋白表达水平提高;其中,Lan CL2蛋白在8例复发的胶质母细胞瘤样本中全部显著高表达,且与胶质母细胞瘤是否复发相关(逻辑回归分析p0.05)。另外,Marcks(Myristoylated alanine-rich C-kinase substrate)、MARCKSL1(MARCKS-like protein 1)、Cortactin、Stathmin 1、Myosin-9、Rasassociatedand pleckstrin homology domains-containing protein 1(RAPH1)和CDC42 effector protein4(CDC42EP4)等蛋白和细胞骨架及迁移侵袭相关,而YAP1、STAT3、TAF12、NCOR2、NUP214、EIF4B和NIF1B等蛋白和核功能与转录因子活化相关。结论:LanCL2基因拷贝数变异与胶质母细胞瘤患者预后相关,且LanCL2蛋白表达与胶质母细胞瘤复发和胶质瘤级别相关。Lan CL2参与胶质母细胞瘤细胞侵袭的调控。
【图文】：

胶质母细胞瘤,胶质瘤,拷贝数,样本

我们还通过对我院的43 例胶质母细胞瘤样本进行回顾性分析，发现与I 级胶质瘤相比，LanCL2 基因在32 例胶质母细胞瘤样本（72%）中的扩增水平较高，且有统计学差异p<0.05)（图2）。图 2 我院的 43 例胶质母细胞瘤样本与 I 级胶质瘤样相比，LanCL2 基因的拷贝数变化。3.2 LanCL2 蛋白表达与胶质母细胞瘤复发和胶质瘤级别相关在本院的55%的胶质母细胞瘤样本中（31 例中有17 例阳性结果），LanCL2蛋白表达水平提高；其中，LanCL2蛋白在8 例复发的胶质母细胞瘤样本中全部显著高表达，且与胶质母细胞瘤是否复发相关（逻辑回归分析p<0.05），提示LanCL2 功能与胶质母细胞瘤细胞的侵袭调控相关，从而导致肿瘤复发（图3）。胶质瘤组织芯片的免疫组化分析结果表明，LanCL2 的蛋白表达水平与胶质瘤的级别有关

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21图 4 免疫组化分析胶质瘤组织芯片中 LanCL2 的表达与定位情况。3.3 LanCL2 参与胶质母细胞瘤细胞侵袭的调控与正常星形细胞相比，LanCL2 蛋白在多种胶质母细胞瘤细胞系中呈高表达。利用siRNA 干扰LanCL2 的表达后，胶质母细胞瘤细胞U-87 MG 的侵袭能力显著降低（图5）。而且，免疫荧光结果显示，LanCL2 主要表达在U-87 MG 细胞的胞质和胞核中，而cortactin 主要表达在细胞质，LanCL2 和cortactin 在细胞质中有共定位，ImagePro 软件分析其重叠系数为0.83（值越接近1，重叠程度越高），Pearson 相关性分析也表明它们的定位相关（图6）。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.41

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