室旁核和蓝斑中多巴胺受体的分布以及来自黑质的纤维投射追踪研究

发布时间：2020-05-05 05:44

【摘要】：背景帕金森病(parkinson's disease,PD)是一种中枢神经系统退行性变疾病。其主要的病理变化是黑质(substantia nigra,SN)多巴胺(dopamine,DA)能神经元大量丢失。PD病人在临床上以静止性震颤、慌张步态为主要躯体运动症状。资料显示,PD患者出现胃轻瘫、便秘等胃肠功能障碍要比躯体运动障碍早数年。迷走神经背核(dorsal motor nucleus of vagus,DMV)是支配和调节胃运动的主要核团。DMV的纤维可分布到胃,对胃产生收缩和舒张的作用。尸检报告,在PD病人的DMV也存在神经元退行性变。我们课题组前期发现:SN内没有直接投射到DMV的神经元,但可以直接投射到下丘脑PVN和LC。形态学资料也表明蓝斑、下丘脑外侧区和室旁核(paraventricular nucleus,PVN)均有纤维投射到DMV。我们认为:SN可能通过PVN、LC和下丘脑外侧核间接地与DMV形成神经通路。SN释放的DA需要与靶细胞上的DA受体结合才能发挥作用,DA受体现分D1、D2、D3、D4和D5五种,在PVN、LC相关的文献中也未发现多巴胺受体形态学的报道。本研究针对PVN和LC两个核团中五种DA受体的表达与分布特点展开研究,采用尼氏染色、免疫荧光和神经追踪等方法,为SN内DA神经元通过PVN、LC调节DMV继而影响胃动力提供形态学依据。目的研究多巴胺受体D1-D5在PVN和LC内的分布情况,及其与投射至PVN和LC两个核团的SN多巴胺能神经纤维末梢的定位关系,为SN通过PVN和LC间接调节DMV继而影响胃动力提供形态学证据。方法1.尼氏染色:确定大鼠脑内SN、PVN、LC等各核团的位置。2.通过免疫荧光技术结合激光共聚焦显微镜观察五种DA受体在PVN、LC的表达和分布。3.神经顺行追踪:运用脑立体定位仪,在SD大鼠两侧的SN内注射BDA-GFP,饲养一周之后在激光共聚焦显微镜下观察大鼠PVN和LC内是否存在BDA标记的神经纤维,并应用免疫荧光双标记技术观察追踪到的神经纤维与表达DA受体的神经细胞的定位关系。结果1.D1-D5在正常大鼠的PVN广泛表达,但是分布不同。其中D1和D5的阳性神经元细胞分布最广;D3、D4次之;D2受体的分布最少。主要分布在PVN的中间部的室旁核内侧小细胞部、室旁核外侧大细胞部、室旁核腹侧部和下丘脑背外侧帽。2.D1-D5在正常大鼠的LC广泛分布。其中D1和D5的阳性表达分布最广,D2受体的分布相对较少。冠状切面上,多巴胺受体阳性神经元呈条索状分布在LC内,紧邻第四脑室外侧壁。3.顺行追踪注入BDA荧光追踪剂后,在SN核团内观察到成团的BDA荧光痕迹,确定注射成功。在PVN、LC核团内,通过荧光显微镜观察到大量丝状BDA阳性纤维。进一步对追踪到BDA-GFP的区域进行D1和D2受体的免疫荧光染色,发现这些绿色丝状的阳性神经纤维大都分布在多巴胺受体反应阳性的神经元周围。结论1.DA五种受体在正常大鼠PVN和LC内均有分布。但以D1和D5的阳性神经元最多,D3和D4次之,D2受体最少。2.SN内多巴胺能神经元可到直接投射到PVN、LC,并环绕在DA受体阳性的神经元周围,进一步明确了SN与PVN和SN与LC之间的神经投射联系。3.该研究为SN通过PVN、LC调节DMV功能,进而影响胃动力提供了一定的形态学支持。
【图文】：

穹隆,亚群,受体

2 冠状面上 PVN 内 PaMP、PaLM、Pav、PaDC 各亚群区域位置，f 是穹隆，。. 2 On the coronal plane, the subregions of the subgroups of PaMP, PaLM, Pav, and PaDC withiN are marked.3 PVN 中五种多巴胺受体的表达及分布DA 受体在正常大鼠的 PVN 广泛表达，但存在差异。五种 DA 受体的阳性细胞大小不一，体积最大的平均直径为 20μm，最小的平均直径为 10μm。阳元细胞呈圆形或椭圆形分布于核团内。DA 受体在 PVN 核内的分布不同。其中 D5 的免疫阳性细胞分布范围最广，D2 受体的分布范围最小，呈看到零星分胞，D3、D4 免疫阳性细胞也是大量分布。在 PVN 的中间部，DA 受体主要分丘脑室旁核内侧小细胞部（paraventricular hypothalamic nucleus, medial parvicelrt, PaMP）；下丘脑外侧室旁核（ paraventricular hypothalamic nucleus, lateral magnocet, PaLM）；下丘脑室旁核腹侧部（paraventricular hypothalamic nucleus, ventral part, PaV丘脑背外侧帽（paraventricular hypothalamic nucleus, dorsal cap, PaDC）。冠状面上，

细胞分布,D1受体

新乡医学院硕士学位论文 D1-D5 的阳性神经元呈对称三角形分布于双侧的第三脑室附近。参照 ArmN 内亚核的划分，本研究对亚核内五种 DA 受体阳性神经元细胞分别在 P达的细胞形态及分布范围进行了描述。 D1 在 PVN 的表达分布图 3 中可以看到，在第三脑室的右侧的三角形区域内，大量的 D1 阳性神布在 PVN 核团内（图 3-B）。细胞染色较深，轮廓清楚，形状为梭形或椭不一，主要有大细胞和小细胞两种，平均直径在 10μ0 椭圆形，m 之间( 图 N的中间部，D1阳性神经元大部分分布于PaMP这个区域，细胞数量达1直径在 10-20μm 之间，个别细胞分布在区域外侧的 PaLM、Pav 区域。
【学位授予单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R742.5

【参考文献】