MGMT基因甲基化状态与脑胶质瘤替莫唑胺化疗的疗效分析

发布时间：2020-05-06 09:53

【摘要】：研究目的本研究通过检测恶性胶质瘤组织中O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(06-methylguanine-DNA methytransferase,MGMT)基因启动子的甲基化状态,讨论其对恶性脑胶质瘤替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)化疗疗效及其预后的影响,以期为预见性、个体化化疗计划的选择提供临床参考。研究方法观察对象:本研究收集安徽省立医院自2014年5月至2016年5月收治的经神经外科手术治疗且术后病理学检查确诊为恶性脑胶质瘤(WHO中枢神经系统肿瘤分类为Ⅲ级、Ⅳ级)的30例患者,其中女性13例,男性17例,年龄26-82岁,间变性星形细胞瘤(WHOⅢ级)7例,间变性少突胶质细胞瘤(WHOⅢ级)4例,胶质母细胞瘤(WHOⅣ级)19例。观察方法:应用亚硫酸氢盐修饰后测序PCR(Bisulfite sequencing PCR,BSP)方法对肿瘤组织进行MGMT基因启动子甲基化状态的检测,依据检测结果分为甲基化组和非甲基化组;30例恶性脑胶质瘤患者均自愿接受神经外科手术治疗、术后行三维适形放射治疗(3DCRT)或适形调强放射治疗(IMRT)和替莫唑胺同步化疗以及6个周期的辅助化疗(5/28方案)。依据WHO实体肿瘤客观疗效评价标准(Response evaluation criteria in solid tumors,RECIST)及美国卫生与公共服务部制定的药物常见不良事件评价标准第四版(Common Terminology Criteria for Adverse Events Version 4.0,CTCAE-V4.0),评定30例恶性脑胶质瘤患者的近期疗效及药物的安全性。追踪记录患者的无进展生存时间,并观察MGMT基因启动子甲基化状态与患者的性别、年龄、KPS评分、病理分级以及手术切除程度等之间的关系。统计学方法:采用SPSS17.0和EXCEL统计软件进行数据分析。应用Fisher确切概率法分析MGMT基因启动子甲基化状态与患者的性别、年龄、KPS评分、病理分级、手术切除程度等临床病理特征的关系以及MGMT基因启动子甲基化状态与患者近期疗效(客观有效率、疾病控制率)的关系。探讨MGMT基因启动子甲基化状态与患者的无进展生存时间的关系采用Kaplan-Meier方法,整体比较采用Log-rank检验并绘制生存曲线图。当P0.05时差异具有统计学意义。研究结果1.在恶性脑胶质瘤肿瘤组织中MGMT基因启动子的甲基化率为73.3%(22/30),非甲基化率为26.7%(8/30)。2.男女两组患者之间、年龄≥50岁和50岁两组患者之间、KPS评分≥80分和80分两组患者之间、WHOⅢ级和WHOⅣ两组患者之间、肿瘤全切和次全切两组患者之间的MGMT基因启动子甲基化状态差异都没有统计学意义(P0.05)。3.MGMT基因启动子甲基化组的近期客观疗效和疾病控制均显著优于MGMT基因启动子非甲基化组(χ2=4.26,P=0.039;χ2=7.27,P=0.007);MGMT基因启动子甲基化组患者的无进展生存时间显著长于MGMT基因启动子非甲基化组(χ2=9.386,P=0.002)。4.所有患者均未出现明显的不良反应。结论1.恶性脑胶质瘤组织MGMT基因启动子甲基化状态与患者的性别、年龄、KPS评分、病理分级以及手术切除程度等均无显著相关性。恶性脑胶质瘤MGMT基因动子甲基化状态与患者使用替莫唑胺治疗的预后密切相关,可以作为恶性脑胶质瘤患者临床预后的指标。2.BSP法检测MGMT基因启动子甲基化状态是一种可靠的办法。MGMT基因启动子甲基化的检测对于恶性脑胶质瘤患者的个体化化疗方案的制定具有重要的指导作用。
【图文】：

逦山东大学硕士学位论文逦逡逑４）电泳：加入样品后，，关闭电泳槽盖，立即打开电源。控制电压在１００Ｖ。逡逑然后样品移动向阳极。３０分钟后关闭电源，停止电泳。逡逑５）观察和拍照：将琼脂糖凝胶从有机玻璃槽中的取出，在凝胶图像分析逡逑仪中上观察结果，记录保存电泳图像。逡逑２．４邋甲基化特异的ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ邋ｓｐｅｃｉｆｉｃ邋ＰＣＲ，ＭＳＰ）逡逑甲基化特异的ＰＣＲ邋（ＭＳＰ）由＾＾１１１１￡１１１等［１９］提出。基本原理是：ＤＮＡ中未逡逑甲基化的胞嘧啶通过亚硫酸氢盐反应转化为尿嘧啶，而５－甲基胞嘧啶不能被逡逑修饰，保持不变。依据修饰后的ＮＤＡ，设计两对针对甲基化与非甲基化基因逡逑，ＭＳＰＤＮＡ。逡逑

。逡逑ｇ）将离心柱移入新的１．５邋ｍｌ邋ＥＰ管中，在离心柱膜的中央处加入３０沁水，逡逑室温静置１分钟，１７９００Ｘｇ，室温，离心１分钟。离心管中的溶液即为逡逑回收的ＤＮＡ片段。逡逑ｈ）取回收后产物５４，邋２％琼脂糖凝胶电泳鉴定产物，单一条带，大小符逡逑合则送测序。依据测序结果分析目的基因启动子的甲基化状态。逡逑３甲基化结果分析逡逑３．１邋ＭＳＰ检测结果分析逡逑甲基化评价和结果判定：逡逑１）逦ＭＧＭＴ基因非甲基化：非甲基化特异性引物有扩增条带，甲基化引物无逡逑扩增条带。逡逑２）逦ＭＧＭＴ基因甲基化：甲基化特异性引物有扩增条带，非甲基化引物无扩逡逑增条带；两种特异性引物均出现条带。逡逑ＮＵ邋Ｍ邋Ｕ邋Ｍ邋Ｕ邋Ｍ邋Ｕ逡逑
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.41

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本文编号：2651085