脑星形胶质细胞中外泌体（exosome）对大鼠脑神经损伤的作用

发布时间：2020-05-14 16:17

【摘要】：外泌体(exosome),是一种细胞主动分泌的大小均一的囊泡样小体,具有脂质双层膜结构,直径大约40-100 nm,密度约1.10~1.18 g/ml,最早发现于体外培养的绵羊红细胞上清液中。不同细胞分泌的外泌体具有不用的组成成分和功能,主要内容物为蛋白质和RNA,可作为疾病诊断的生物标志物。外泌体在体液中天然存在,包括血液,唾液,尿液和母乳。以前的研究表明外泌体发挥蛋白质转运功能并交换蛋白质和脂质。直到2007年,外泌体也具有核酸,并且发现它们参与细胞内通讯。它的蛋白质,RNA和脂肪成分是特异性的,并且具有重要的信号分子~([1]),这些信号分子在许多疾病的早期诊断中发挥重要作用。这使得外泌体发展的空间也在快速扩展,并成为热门的研究对象。星形胶质细胞(astrocyte)是一种大脑中的神经胶质细胞,直径约3-5μm。星形胶质细胞是神经系统的重要组成成分,在大脑发育过程中与神经细胞互相依存,具有一定的促神经细胞分化作用。通过持续培养As细胞并收集培养基作为实验材料,提取As细胞外泌体。采用超速离心法提取到外泌体后,通过电镜扫描的方法检测外泌体的直径形态,扫描电子显微镜(SEM)利用能量为1至30kV的电子束进行操作,印刷在待分析的样品表面上,并且变成通过电子与样品表面之间的相互作用产生的电子图像,检测到exosome约在40nm至200nm的直径,最后通过BCA法检测exosome表面蛋白的浓度,在分子水平筛选浓度合适的exosome进行生物水平研究。在制作大鼠的脑中风模型时,选择线栓法制作大鼠的脑缺血再灌注模型,腹腔注射exosome后,通过术后观察大鼠的行为,以及Zea Longa的5分制评分标准进行神经功能缺失体征评分,综合评价大鼠鼠后恢复情况,分析外泌体在脑中风大鼠模型中的作用。本研究利用小鼠脑星形胶质细胞提取并检测出外泌体后,对脑神经受损的大鼠进行注射,观察外泌体对神经受损动物的作用,初步证明As细胞分泌的外泌体能够有助于神经受损动物的功能性恢复,初步探索外泌体在动物体内的神经功能恢复作用,为外泌体在临床医学方面的应用奠定一定的理论基础。
【图文】：

技术路线图,技术路线

17图 1.1 技术路线Fig.1.1 Technology roadmap1.6 本文结构安排本论文包括八个章节，具体结构安排如下：在第一章绪论部分，主要介绍了外泌体的定义，形态结构，以及直径大小，，阐述了外泌体在现阶段生物研究中的重要作用，以及国内外目前已经使用外泌体进行的科研工作，简单概括了课题主要的研究内容及创新点，并在章节最后给出文章结构安排。第二章是小鼠原代脑星形胶质细胞的提取。从脊椎脱臼法处死小鼠开始，介绍了从成年小鼠大脑中提取原代神经细胞的技术方法，是后续实验的理论基础和技术保障。第三章是原代细胞的分离纯化及培养。本章节承接上一章节提取到的原代细

细胞团,箭头,细胞

图 3.1 箭头所示为分离后的 p0 代 As 细胞团.1 the arrows indicate the p0 generation of As cells after sepa图 3.2 稳定后的 As 细胞（p0）Fig3.2 stable astrocyte (p0)
【学位授予单位】：昆明理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R741

【参考文献】