冲击流诱导Kaiso介导的血管内皮细胞炎症

发布时间：2020-05-17 00:29

【摘要】：目的:颅内动脉瘤的病因还不十分清楚。目前认为血流动力学变化所引发的内皮细胞损伤、血管炎症和管壁重构是颅内动脉瘤形成和破裂的可能原因。本研究通过模拟血管分叉处血流动力学的体外T型流动系统作用于人脐静脉内皮细胞(HUVEC),探究血流动力学对内皮细胞形态的影响及内皮细胞受损的相关机制。方法:体外培养HUVEC及运用RNAi kaiso重组慢病毒转染HUVEC。将两种细胞种植于无菌载玻片上,细胞完全融合后,将载玻片置入T型流动系统。加载500ml/min流量的的冲击流0、3、6、12小时。运用免疫细胞化学技术、Western Blot和免疫共沉淀技术检测细胞形态学变化及kaiso相关蛋白的表达情况。结果:(1)正常HUVEC在冲击流场的作用下的形态学变化:a.普通倒置显微镜下观察:1区细胞基本不变;2区细胞密度明显下降,细胞连接分离,细胞间隙拉大,并发生与流体方向平行的轴样性拉长;3区细胞密度增大,细胞变圆;b.免疫细胞化学结果显示:在冲击流场的作用下,细胞骨架2区出现了与冲击流方向平行一致轴样性分布,而1区和3区无明显变化。(2)正常HUVEC的Western Blot结果显示:随着冲击时间延长,HUVEC内mmp-2、mmp-9、kaiso的表达上升,timp-2、timp-1表达下降,具有统计学意义(P0.05),而P120的表达无明显变化(P0.05);正常HUVEC的免疫共沉淀结果显示:随着冲击时间延长,kaiso和p120在HUVEC内的结合量明显上升。(3)运用RNAi kaiso慢病毒转染的HUVEC,其Western Blot结果显示:mmp-2、mmp-9、timp-1的表达下降,具有统计学意义(P0.05),timp-2和p120表达变化不大(P0.05)。结论:在冲击流场的作用下,高WSS和高WSSG区域的细胞密度明显下降,细胞连接分离,细胞间隙拉大,并发生与流体方向平行的轴样性拉长,p120与kaiso的结合增加,从而促进了炎症因子mmp-2、mmp-9的表达,引发血管壁炎症反应,造成内皮细胞损伤,促进颅内动脉瘤的形成。
【图文】：

图一图 1 示冲击 12h 后不同区域内皮细胞形态差异 A）1 区，，细胞密度基本无变化，细胞维持融合状态，但形态仍为多边形；B）2 区，细胞密度下降明显，细胞间连接有分离，细胞间隙拉大，被拉长，且有一个轴样性分布并与流体方向平行一致；C）3 区，细胞密度增加，形态与冲之前相比更圆。冲击流为水平方向。图二图2 示在倒置荧光显微镜下多个视野合并成的冲击12h后不同区域内皮细胞形态差异图片。3.2 免疫细胞化学检测冲击流场作用下内皮细胞 VE-Cadherin 和细胞骨架 F-actin 的变化情况

形态与冲之前相比更圆。冲击流为水平方向。图二图2 示在倒置荧光显微镜下多个视野合并成的冲击12h后不同区域内皮细胞形态差异图片。3.2 免疫细胞化学检测冲击流场作用下内皮细胞 VE-Cadherin 和细胞骨架 F-actin 的变化情况加载 500ml/min 流量的冲击流场作用下，对载玻片上的正常细胞给予 12h的冲击后，对膜蛋白 VE-Cadherin 进行间接荧光染色，对细胞骨架 F-actin 用鬼笔环肽进行直接荧光染色，探索不同剪切力和剪切力梯度区域细胞对冲击流场
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.41

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本文编号：2667603