【摘要】：目的:探究丁苯酞给药对于脑梗死模型鼠脑梗死体积和神经功能恢复的影响。方法:C57BL/6J小鼠分为假手术组(sham组),生理盐水组(vehicle组)及丁苯酞给药组(NBP组)。光化学脑梗造模前均对小鼠进行为期三天的转棒训练。造模后,vehicle组及NBP组分别给与生理盐水及2mg/ml的NBP溶液,10ul/g腹腔注射。分别于造模前,造模后1、3、7、14、21、28天用m NSS量表及转棒试验评估小鼠神经功能恢复情况。第7天采用Nissl染色测定小鼠脑梗死体积。结果:造模后第14、21及第28天,对比vehicle组,NBP组小鼠m NSS评分较低(P0.05);造模后第21、28天,vehicle组转棒潜伏期均低于NBP组(P0.05);第7天时,NBP组平均梗死体积占比小于Vehicle组(P0.05)。结论:NBP给药可明显改善光化学脑梗两周后后神经功能缺损情况,且可减小造模后一周梗死体积。目的:探究光化学脑梗后NBP给药是否能够促进梗死周边区神经血管再生以及NBP干预下的脑梗死小鼠神经细胞自噬活性变化。方法:将C57BL/6J小鼠分为四组:sham组、vehicle组、NBP组及NBP+3-MA组。vehicle组于造模后第一天给与生理盐水,NBP及NBP+3-MA组给与2mg/ml的NBP溶液,均为10ul/g腹腔注射。此外,NPB+3-MA组还需给与自噬抑制剂3-MA。造模后持续一周Brdu给药,7天后处死小鼠免疫荧光染色观察Brdu、DCX、CD31及Neu N阳性细胞数目。侧脑室室管膜下区(SVZ区)Brdu+/DCX+细胞代表新生未成熟神经元;梗死周边区Brdu+/CD31+细胞代表新生血管内皮细胞,Neu N+细胞可评估梗死周边存活神经元。梗死后14天取小鼠梗死组织,Western blot检测自噬相关蛋白P62、Beclin-1、LC3B表达情况。结果:免疫荧光染色结果显示,相较vehicle组,NBP组及NBP+3-MA的小鼠SVZ区DCX+/Brdu+细胞明显较多(P0.05),且NBP组DCX+/Brdu+细胞多于NBP+3-MA组(P0.05)。NBP组相比vehicle组及NBP+3-MA组,其梗死周边区Brdu+/CD31+及Neu N+/DAPI+细胞数均明显较多(P0.05),vehicle组与NBP+3-MA组之间则无无明显差异(P0.05)。WB测定自噬相关蛋白表达结果显示,对比vehicle组,NBP组相较vehicle组,其Beclin-1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达量明显升高,P62明显降低(P0.05);对比NBP组,3-MA合并给药组LC3Ⅱ/Ⅰ表达量明显减低,P62表达量较高(P0.05)。结论:NBP可能通过促进光化学脑梗死后自噬行为,改善梗死周边区神经细胞存活,促进梗死后神经血管再生情况。此种保护作用可部分被自噬抑制剂3-MA削弱。目的:为了探究PI3K-Akt-m TOR经典信号通路在NBP对脑微血管内皮细胞糖氧剥夺再灌注损伤保护效应中所发挥的作用。方法:将鼠脑微血管内皮细胞(BMEC)分为正常对照组(Control)、糖氧剥夺再灌注组(OGD)、糖氧剥夺再灌注+NBP组(NBP)、糖氧剥夺再灌注+NBP+LY294002组(OGD/NL)四组来研究。不同组BMEC糖氧剥夺造模前分别进行不同干预。NBP及OGD/NL组OGD造模前分别用NBP及NBP+LY294002预处理12h。MTT实验观察OGD后细胞存活率,WB检测自噬相关蛋白及PI3K-Akt-m TOR信号通路表达情况。结果:相较OGD组,不同浓度(1u M、10u M及100u M)NBP预处理均可以提高OGD后细胞存活率(P0.05),但NBP和LY294002同时干预,其存活率显著低于不同浓度NBP及OGD组(P0.05)。与control组对比,OGD组及OGD/NL组细胞表现出了较高的Beclin-1及LC3Ⅱ/Ⅰ表达量(P0.05)。NBP及OGD/NL组的Beclin-1及LC3Ⅱ/Ⅰ表达量对比OGD组明显降低(P0.05),P62蛋白表达明显升高(P0.05)。OGD/NL组对比NBP组有更低的P62表达量(P0.05)。NBP组p-m TOR/m TOR、p-Akt/Akt比值均较OGD组高(P0.05)。NBP组与OGD/NL组对比,除NBP组PI3K表达量较高外(P0.05),余无明显统计学差异(P0.05)结论:糖氧剥夺再灌注损伤可增加细胞内自噬活性,而NBP预处理可通过激活PI3K-Akt-m TOR通路降低自噬活性,从而对OGD细胞起到一定保护作用。
【图文】：
法 SPSS 21 分析。计量资料采用均值±标准差表示。的方差分析，梗死百分比采用独立样本 t 检验，P义。化学脑梗后神经功能恢复的影响分造模后第 1，3，7 天，NBP 组及 vehicle 组小鼠 m，造模后第 14、21 及第 28 天，NBP 组小鼠 mNSS 评统计学意义（P<0.05），见图 1。
图 2 不同时点三组小鼠转棒试验结果2. NBP 对光化学脑梗后第 7 天梗死体积的影响梗死第 7 天对各组小鼠取脑进行尼氏染色，，Vehicle 组平均梗死体积占比为（3.61±0.64）%，NBP 组平均梗死体积占比（2.72±0.81）%，两组间的梗死体积占比具有统计学差异（P<0.05）。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R743.3
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