新型血清糖指纹技术在中枢性眩晕病人临床诊断中的应用

发布时间：2020-05-28 22:58

【摘要】：目的:通过测定中枢性眩晕患者及正常健康查体人群血液中两种游离单糖的结果,并测定降解后单糖的峰面积,进行分析比较,以观察和分析血清中单糖的水平与中枢性眩晕患者之间的相关性,从而期望为中枢性眩晕患者的临床诊断提供一种新的血清生物标志物。方法:选取2016年12月至2017年12月在枣庄市中医医院住院或者就诊的患者,年龄在40岁至80岁之间;临床就诊或者住院时,其主诉为眩晕;临床诊断均根据2010年的《眩晕诊治专家共识》中的,关于中枢性眩晕的临床诊断;其他的需要符合文中的纳入本研究的标准,同时患者本人及其家属均同意本研究的内容,并且签署了相关的知情同意书。根据上述,共有125名眩晕的病人被纳入到本研究中,组成为患者组,另外,以青医附院健康查体人群共89例,组成了健康组。首先根据单糖标准品的HPLC分析的结果,绘制出两种游离单糖的标准曲线,从而得到回归方程。然后对血清样本进行水解、衍生及HPLC分析,并得到样本的液相色谱图,计算出样本中游离单糖的浓度,用方差分析及相关性分析的统计学方法比较各组的游离单糖浓度,并通过ROC曲线评估游离单糖对中枢性眩晕患者的诊断价值。再通过高效液相色谱法测定降解后单糖的峰面积,建立降解单糖与眩晕患者之间的联系,并通过各种降解单糖的ROC曲线评估降解单糖对中枢性眩晕患者的诊断价值。结果:(1)通过测定两种游离单糖,患者组和健康体检组血液中的甘露糖含量分别为91.62μmol/L和73.50μmol/L,ROC曲线显示甘露糖具有更高的敏感度,为96%,特异性为44%,曲线下面积为0.72,葡萄糖的含量分别为5679μmol/L和6071μmol/L,上述组间的差异均被视为具有统计学的意义(P0.05)。(2)在比较血清游离单糖的实验结果时本论文引入了葡萄糖比甘露糖(G/M),利用Graphpad prism6.0绘制ROC曲线,通过计算ROC曲线下面积,G/M有较强的敏感度和特异性,分别为79%和87%,曲线下面积为0.89,分析结果具有统计学意义(p0.0001)。(3)通过高效液相色谱法测定降解后单糖的峰面积,患者组和健康体检组血液中的降解后甘露糖峰面积分别为1.473和3.420,ROC曲线显示敏感性91%,特异性74%,降解后葡萄糖峰面积分别为8.379和15.29,ROC曲线显示敏感性86%,特异性72%,降解后半乳糖峰面积分别为2.571和3.905,ROC曲线显示敏感性87%,特异性63%,降解后半乳糖胺峰面积分别为1.589和1.138,ROC曲线显示敏感性57%,特异性85%,降解后葡萄糖胺峰面积分别为17.39和17.13,降解后岩藻糖峰面积分别为0.6549和0.2734,上述组间的差异均被视为具有统计学的意义(P0.05)。结论:中枢性眩晕患者单糖水平与健康正常人不同,游离单糖中以甘露糖对中枢性眩晕患者的诊断价值较高,降解单糖中以甘露糖、葡萄糖、半乳糖的诊断价值较高,因此检测血清中的单糖水平有助于对中枢性眩晕患者的诊断,有望能够为中枢性眩晕患者的临床诊断提供一种新的血清生物标志物。
【图文】：

色谱图,血清样品,烘箱,色谱图

获得了该样品中 2 种单糖的峰面积数据，通过统计学分析计算每一种单糖的 RSD值。3 实验结果3.1 血清样品水解条件的优化实验过程中通过向血清样品中加入标准品溶液，经过水解衍生后上样，考察水解过程中 2 种单糖在三氟乙酸和血清环境处理过程中的损失率，实验测得甘露糖、葡萄糖的损失率依次为 15.4 %和 22.0 %。本论文通过烘箱和离心浓缩仪对水解后的血清样品进行干燥，干燥温度设定为50 ℃，反应时间均为 10h。考察真空度的高低对血清样品水解过程的影响。图 1-1表明通过烘箱进行干燥的样品，甘露糖、葡萄糖峰面积约为离心浓缩仪组峰面积的20 %，从而表明真空度对干燥过程非常重要，在离心浓缩过程中真空泵的效率及稳定性、管路连接的密封性会使仪器的的真空度产生差异或波动，从而导致样品的峰面积产生巨大的差距，因此在离心浓缩过程中通过真空表严格控制真空度，对保证实验结果的准确性有着很重要的意义。

谱图,条件色,单糖,谱图

第一部分单糖的 HPLC 分析方法峰面积最大，且各种单糖的峰面积差距最小均在 30000 左右，，但是各种单糖进行高效液相检测时峰型及分离度较差，且在单糖浓度在 0.5 mg/mL 时已经超过了色谱柱柱容量，出现了平顶峰（见图 1-2 A）。通过氢氧化钠进行衍生后用盐酸调节 pH 至中性后萃取检测，实验结果表明，甘露糖、葡萄糖的峰面积要比氨水衍生时峰面积要小 50 %，约为 15000 左右，但氢氧化钠中性组的峰型明显优于氨水组，且无平顶峰（见图 1-2 B）。因此我们选择氢氧化钠作为 PMP 衍生化过程中的碱性创建试剂。表 1-1 0.5 mg/mL 2 种游离单糖不同碱性创建试剂的峰面积0.5 mg/mL 单糖标准品氨水组峰面积氢氧化钠中性组峰面积Man 30093.1 15932.9Glc 40923.8 13131.1
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R741

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