中脑导水管周围灰质BDNF高表达对癫痫的影响

发布时间：2020-05-30 13:45

【摘要】：目的:观察经由局部神经营养因子持续高表达作用所致腹外侧中脑水管周围灰质(the ventrolateral Periaqueductal Gray,vPAG)的神经保护对癫痫发作的影响。方法:8~10周龄健康雄性SD大鼠80只随机分成3组:携带BDNF基因病毒组(32只)、未携带BDNF基因病毒组(24只)、生理盐水组(24只)。利用脑立体定位注射技术,分别向3组SD大鼠脑内vPAG区域注射携带BDNF及GFP基因的腺相关病毒载体、未携带BDNF基因的同源腺相关病毒载体及生理盐水。注射后48 h,取8只携带BDNF基因病毒组的大鼠的vPAG脑组织做冰冻切片,并在荧光镜下拍照,应用GFP标记腺相关病毒载体检测注射部位的准确性。在注射后的第3天、6天、10天、15天每组每个时间点取6只大鼠vPAG活体组织,应用western blot从蛋白水平检测基因导入后各时间节点vPAG局部BDNF的表达量变化。另选择8~10周健康雄性SD大鼠120只分成3组:携带BDNF基因病毒组(40只)、未携带BDNF基因组(40只)、生理盐水组(40只)。利用脑立体定位注射技术,分别向3组大鼠脑内vPAG区域注射携带BDNF基因的腺相关病毒载体,未携带BDNF基因的同源腺相关病毒载体,生理盐水。基因导入7天后每组取SD大鼠20只予以匹罗卡品腹腔注射致急性癫痫发作,通过行为学记录方法观察BDNF基因导入vPAG对大鼠急性癫痫发作的影响。基因导入3天后每组取SD大鼠20只予以氯化锂-匹罗卡品腹腔注射致癫痫持续状态(Status Epilepticus,SE),通过录像行为记录方法观察BDNF基因导入vPAG对大鼠癫痫持续状态后不同时间点癫痫自发性发作的影响(癫痫持续状态后第10~50天)。结果:显微荧光镜下GFP在vPAG区域发出绿色荧光。在立体定位注射后的第3天、6天、10天、15天不同时间点上,与未携带BDNF基因病毒组、生理盐水组比较,携带BDNF基因病毒组vPAG的BDNF在western blot表达明显增高(P均0.05)。且携带BDNF基因病毒组的BDNF在3天、6天、10天的表达量逐渐增高~1,第15天较第10天无明显统计学差异。匹罗卡品所致急性癫痫模型中,携带基因病毒组较未携带基因病毒组、生理盐水组、空白对照组的大鼠发作持续时间及发作强度上均有显著性差异(P均0.01)。氯化锂-匹罗卡品致癫痫持续状态模型中,携带基因病毒组较未携带基因病毒组、生理盐水组、空白对照组在癫痫持续状态后10~50天大鼠自发性痫性发作频率、持续时间及严重程度上均有显著性差异(P均0.01)。结论:vPAG局部脑源性神经营养因子持续高表达可抑制癫痫的发展。
【图文】：

实验组,对照组

“*”代表实验组与对照组比较，P＜0.05；“**”代表实验组与对照组比较，P＜0.01

实验组,对照组

“*”代表实验组与对照组比较，，P＜0.05；“**”代表实验组与对照组比较，P＜0.01
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R742.1

【参考文献】