TNIK在颞叶癫痫患者和动物模型脑组织中的表达研究

发布时间：2020-05-31 13:39

【摘要】：研究背景癫痫(Epilepsy,EP)是一种由神经元异常放电引发的常见神经系统综合征,在不同年龄段人群均可发病。如今癫痫已成为全球性的健康问题,给数千万家庭带来较为沉重的负担。截至目前,应用抗癫痫药物是临床实践中的主要治疗方式,但经过系统、规范的药物治疗后仍有约30%的患者癫痫发作难以得到有效控制,称为难治性癫痫(Refractory epilepsy,RE)。资料显示,癫痫发病涉及神经递质、离子通道、神经胶质细胞、氧化应激等方面的异常,究其难治性原因则更为复杂。寻找癫痫新的特异性靶点,研究具体作用机制始终是相关研究人员的工作重点。TNIK作为生发中心激酶家族的一员,可以通过调节不同信号通路介导细胞凋亡、兴奋性信号转导等多种生理功能。因此,明确TNIK在癫痫发生发展中扮演何种角色,探究其可能的作用机制具有非常重要的现实意义。研究目的通过分别检测颞叶癫痫患者和慢性癫痫动物模型脑组织中的TNIK表达情况,探究TNIK与癫痫之间的关联。研究方法从接受难治性颞叶癫痫手术的患者脑组织标本库中,随机抽取20个病例的标本作为癫痫组,随机选取接受颅脑外伤减压手术的10位患者,将其脑组织标本作为对照组。随机选择体重位于210-230g区间,健康的成年雄性Sprague Dawley大鼠给予匹罗卡品腹腔注射,诱导其出现癫痫持续状态,饲养2个月后作为慢性癫痫动物模型。腹腔注射等量生理盐水,将在相同条件下饲养2个月的大鼠纳入对照组。通过免疫荧光明确TNIK在脑组织中的表达部位,应用蛋白免疫印迹、荧光定量PCR和免疫组化等方法研究TNIK在颞叶癫痫患者和慢性癫痫大鼠脑组织中的表达水平。研究结果在颞叶癫痫患者和匹罗卡品诱导的慢性癫痫大鼠模型的脑组织中,TNIK与神经元标记物MAP2共定位,主要在脑组织神经元而不是星形胶质细胞中表达。颞叶癫痫患者脑组织中的TNIK蛋白表达水平较对照组病例显著降低(p0.01)。在匹罗卡品诱导的慢性癫痫动物模型中,癫痫组大鼠海马和皮层中TNIK的蛋白表达水平较对照组大鼠显著降低(p0.01);癫痫组大鼠海马中TNIK的基因相对表达水平较对照组大鼠显著降低(p0.01);癫痫组大鼠皮层中TNIK的基因相对表达水平较对照组大鼠降低(p0.05)。研究结论TNIK在颞叶癫痫患者和匹罗卡品诱导的慢性癫痫大鼠模型脑组织中的表达水平均降低,且TNIK主要表达于神经元,表明TNIK很可能在癫痫的发生发展中发挥重要作用。
【图文】：

８只追加注射后仍未达到Ｒａｃｉｎｅ评分４级以上标准，ＳＥ后２只出现死亡，剩余逡逑３０只大鼠可进行实验操作，造模成功率为７５．０％。下图表示了大鼠在不同状态时逡逑的脑电监测情况（见图１）。逡逑Ａ邋＞逦丨邋ＳＲＳ邋｜逡逑Ｅ邋丨．，，，一＾—一－。叫？碰逦—．－逡逑５邋Ｓ逡逑—逦１邋Ｓ逡逑ｐ邋Ｐｉｌｏｃａｒｐｉｎｅ逦ＳＥ逦．逡逑Ｉ逦＿＿＿＿＿逡逑！ｌｔ——ｍｉ逡逑１００邋ｓ逡逑Ｃ逦１Ｓ逡逑＾邋１００邋ｓ逡逑图１．大鼠处于不同状态时的脑电图逡逑Ａ．大鼠慢性癫痫模型发生自发性发作的脑电图；Ｂ．应用匹罗卡品诱导出癫痫持逡逑２２逡逑

山东大学硕士学位论文的脑电图；Ｃ．大鼠正常脑电图。（注：ＳＲＳ，Ｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓ邋Ｒｅｃｕｒｒｅｎｔ邋Ｓｅｉｚｕ反复发作；ＳＥ，，Ｓｔａｔｕｓ邋Ｅｐｉｌｅｐｔｉｃｕｓ，癫痫持续状态）逡逑ＴＮＩＫ在颞叶vd痫患者脑组织中的表达情况逡逑ｅｓｔｅｒｎ邋Ｂｌｏｔ结果显示，内参ＧＡＰＤＨ检测条带约处于３６ｋＤａ，我们的ＴＮＩＫ在分子量约为１５０ｋＤａ处出现。ＴＮＩＫ的表达水平用目的蛋白与光密度值（０Ｄ）来表示。从曝光后的条带来看，颞叶癫痫患者与对ＴＮＩＫ条带明显变浅。计算分析后的结果进一步证实，ＴＮＩＫ在颞叶组织中的表达水平较对照组显著降低，差异具有统计学意义（０．７４±０．０．０１，ｐ＜０．０１）（见图邋２）。逡逑
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R742.1

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本文编号：2689939