外泌体在大疱性类天疱疮合并神经系统疾病中的免疫学机制研究

发布时间：2020-06-02 09:51

【摘要】：背景:大疱性类天疱疮(Bullous Pemphigoid,BP)是一种好发于老年人的自身免疫性大疱性皮肤病,BP患者中神经系统疾病(N.eurological Disease,ND)的发生率明显高于正常人,包括痴呆、脑血管病等,二者存在着某种关系;外泌体是一种能被大多数细胞分泌的微小囊泡,研究发现外泌体中含有特异的蛋白和核酸,且能靶向特定细胞或组织,外泌体已经成为疾病诊断治疗的潜在有效方式,在精准医学发展上有极大前景。通过外泌体对BP合并ND进行相关机制研究在对BP的预防及诊治将起到重要作用。目的:本项目拟通过研究BP患者血清、血浆、疱液及尿液外泌体的致病性及其携带抗体的免疫学特性,以对BP与ND在发病机制上的关系及外泌体在其中所发挥的作用进行初步探究。方法:我们收集了 2018年10月-2019年3月在北京协和医院皮肤科门诊及住院的16名BP患者(年龄63-90岁)的血清、血浆、疱液及尿液,其中6名患者合并ND(包括脑血管病和痴呆),以及10名无免疫相关皮肤病及ND的老年患者(年龄65-81岁)的血清、血浆及尿液做正常对照(Normal Control,NC)。提取样本外泌体后通过电镜、纳米颗粒跟踪分析术(Nanosight Tracking Analysis,NTA)及蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)三种方法检测验证外泌体。裂解外泌体后运用定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)及 WB 方法检测外泌体携带的相关蛋白及微小核糖核酸(microribonucleic acid,microRNA)。结果:患者及对照组样本中均存在大量微小囊泡,NTA检测到直径约在50-150 nm的囊泡占大多数,电镜下可见大量囊泡结构的物质,WB检测到外泌体标记物CD9,以上均证实患者及对照组样本中存在外泌体。提取并裂解其中的外泌体,qPCR结果发现P-S396-tau,P-T181-tau,miR-141 及 miR-214 在 BP 患者尤其是 BP+ND 患者疱液、血清、血浆、尿液中比对照组显著升高,而Aβ1-42、miR-146b-5p,miR-193a-3p则在BP患者尤其是BP+ND患者疱液、血清、血浆、尿液中比对照组显著降低。结论:患者血清、血浆、疱液及尿液均可检测到外泌体,外泌体中携带BP相关抗体及基因,可能通过表位扩散在BP及BP合并ND发挥重要作用,具有成为BP的无创性检测工具潜力,对疾病的预防及诊治也同样具有重要价值。
【图文】：

大疱,水疱,红斑,临床表现

前目逡逑大疱性类天疱疮（Ｂｕｌｌｏｕｓ邋ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ，邋ＢＰ）是一种严重的自身免疫性大疱性皮逡逑肤病，常发生在老年人。临床表现为水肿性红斑基础上发生水疱和大疱（图１．），逡逑严重影响患者生活质量、死亡率较高。有较多文献报道ＢＰ可见于多种神经系统疾病逡逑（Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ邋ｄｉｓｅａｓｅｓ，？？）患者，如阿尔兹海默病、帕金森病、脑血管病及多发逡逑性硬化等等。相关研宄对ＢＰ患者进行调查，发现ＢＰ患者中痴呆、帕金森病的发病率逡逑相当于对照组的３倍［１］，脑卒中发病后可产生ＢＰ相关自身抗体［２］。更有相关统计学研逡逑究发现３３．邋５％的ＢＰ患者患有神经系统疾病，明显较对照组的１１．邋３％高，特别是痴呆（ＢＰ逡逑有２０．邋６％合并痴呆，而正常人２．邋９％合并痴呆）［３］。多项流行病学资料表明ＢＰ合并ＮＤ逡逑可能存在某种内在的联系＋８］。ＢＰ患者血清所识别的主要自身抗原为ＢＰＡＧ１邋（ＢＰ２３０）和逡逑ＢＰＡＧ２邋（ＢＰ１８０），我们前期实验通过酶联免疫吸附试验（ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄ邋ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ逡逑ａｓｓａｙ邋ＥＬＩＳＡ）检测帕金森病（Ｐａｒｋｉｎｓｏｎ’邋ｓ邋Ｄｉｓｅａｓｅ，邋ＰＤ）患者血清中抗ＢＰＡＧ１和逡逑ＢＰＡＧ２抗体情况

示意图,示意图,细胞,淋巴细胞

目前患者均在随访中，相关机制研究在对ＢＰ的预防及治疗上将起到重要逡逑作用。逡逑１９８１年外泌体（图２．）首次在各种正常细胞及肿瘤细胞株中被发现［９］。这些通逡逑过胞吞胞吐作用产生的纳米级别的囊泡，即外泌体，被定义为直径在３０－邋１５０邋ｒｎｎ范逡逑围，密度１．邋１３邋－邋１．邋１９邋ｇ／ｍｌ，在透射电子显微镜下表现为扁平的球体或碟形的微小囊逡逑泡。另外，外泌体具有丰富的蛋白标记物（包括ＴＳＧ１０１，邋ＡＬＩＸ，ＣＤ９，邋ＣＤ６３，邋ＣＤ８１，邋ＣＤ８２，逡逑ＣＤ８６，邋Ｈｓｐ７０，，及Ｈｓｐ９０等等），其标记物因不同细胞来源而不同［ｗ］。研究发现基本所逡逑有类型的细胞都可以产生外泌体，包括Ｂ淋巴细胞、Ｔ淋巴细胞、肿瘤细胞、星形胶逡逑质细胞、神经细胞、肥大细胞、血液中的各种细胞、树突状细胞、上皮细胞等等。外逡逑泌体产生后会被释放入细胞外基质环境中，包括血浆、尿液、唾液、恶性胸腔积液、逡逑７逡逑
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R758.66;R741

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