STIP1通过TRAP1-AKT通路促进胶质母细胞瘤侵袭的研究

发布时间：2020-06-06 01:45

【摘要】：研究目的:人脑胶质瘤作为最常见的脑内原发性恶性肿瘤,其发病率、复发率、死亡率高和治愈率低,尤其胶质母细胞瘤。随着医疗诊治的发展,越来越多的研究倾向于分子靶向治疗,寻求特异性较强的靶点,制定新的治疗方案,将有可能对胶质瘤治疗获得突破性进展。近年诸多研究证实,磷酸化应激诱导蛋白(STIP1蛋白)参与了多种肿瘤的发生与发展过程。本研究检测STIP1在人脑胶质瘤组织标本及非瘤脑组织标本中的表达差异;研究STIP1对胶质瘤细胞株增殖、侵袭等功能的影响;探讨STIP1和TRAP1、AKT在胶质瘤中相互作用的关系及靶向于AKT抑制胶质瘤侵袭作用;为胶质瘤进一步诊断和分子靶向治疗奠定理论基础。研究方法:选择胶质瘤标本(液氮中冻存)35例、非瘤脑组织6例(均来自2000年至2016年间苏州大学附属第一医院神经外科手术切除),提取RNA,运用实时定量PCR(qRT-PCR)技术,检测STIP1基因在不同级别胶质瘤组织和非瘤脑组织标本中表达有无差异;再通过Western Blot、免疫组化方法检测STIP1蛋白表达水平差异。将慢病毒(STIP1-siRNA)稳定转染到U87、U251胶质瘤细胞株中,运用MTT检测细胞的增殖能力;transwell实验检测细胞侵袭能力。Western Blot检测转染前后STIP1、TRAP1、AKT、p-AKT、MMP2表达情况。结果:1、STIP1在人脑胶质母细胞质瘤中基因及蛋白水平明显高于非瘤脑组织。运用qRT-PCR技术,对35例不同级别的人脑胶质瘤组织标本和6例非瘤脑组织标本中STIP1基因表达进行分析。其结果提示:STIP1的基因在低级别胶质瘤与非瘤脑组织见未见明显差异(P㧐0.05),胶质母细胞瘤与非瘤脑组织存在明显差异(P0.05)。免疫组化及Western Blot检测示STIP1在胶质母细胞瘤中的表达高于非瘤脑组织。2、下调STIP1表达抑制胶质瘤细胞株增殖和侵袭。利用慢病毒稳定转染技术,在U87、U251胶质瘤细胞株中下调STIP1表达后,MTT实验检测明显抑制了细胞增殖,Transwell实验表明,侵袭能力下降。3、下调STIP1表达后TRAP1,p-AKT,MMP2蛋白表达下降。慢病毒转染U87,U251细胞下调STIP1表达,Western Blot结果显示TRAP1蛋白表达下降,肿瘤侵袭性相关性蛋白p-AKT、MMP2表达下降。结论:(1)STIP1在人脑胶质母细胞瘤中表达水平明显高于非瘤脑组织。(2)下调STIP1的表达能够抑制胶质瘤细胞株增殖和侵袭。(3)STIP1通过TRAP1-AKT通路调控胶质瘤细胞侵袭作用。
【图文】：

胶质母细胞瘤,脑组织

图 2：STIP1 在胶质母细胞瘤中表达明显高于非瘤脑组织非瘤脑组织与不同级别胶质瘤中 STIP1 基因的表达。B、C、D：Western blot、免疫组化、疫荧光结果提示胶质母细胞瘤中 STIP1 蛋白表达明显高于非瘤脑组织。讨论肿瘤的发生是一群失控的同质性的肿瘤细胞所组成，每个肿瘤细胞都具有独立殖的能力，并且可通过转移侵入其他机体组织造成肿瘤细胞的扩散[1]。传统意肿瘤治疗包括手术切除、化疗和放疗，，针对性并不强，恶性肿瘤的预后较差，存率不高，复发的可能性也较大[2, 3]。胶质母细胞瘤被 WHO 组织认定为第形胶质瘤，即使通过外科手术切除，放疗和化疗的方式来抑制胶质母细胞瘤的然而其治疗效果并不明显[4]。早期研究证实[5]，胶质母细胞瘤样干细胞对传统放疗都有一定的抵抗特性。因此，联合靶向疗法为肿瘤治疗提供了新的途径。分子靶向治疗主要针对瘤体组织或瘤体细胞上的某些特殊传导通路上的特异

序列,慢病毒,干扰效果,空白

24图 2-1 示 siRNA 序列的筛选A：将 siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3 三条序列慢病毒分别转入 U87 和 U251 细胞中，同时设置空白和阴性对照组，结果显示 siRNA 干扰效果最理想。B：将三条序列分别转染 U87 和 U251细胞后，免疫荧光检测转染效率提示均达 90%以上。C、D：分别在 U87 和 U251 细胞中，免疫荧光和 Western blot 技术检测 STIP1-siRNA 组中 STIP1 蛋白表达明显低于空白组、阴性对照组。4、细胞增殖试验（MTT）结果提示下调 STIP1 组中的细胞增殖能力较空白组和阴性对照组明显下降（**P＜0.01）。细胞侵袭实验（Transwell）结果提示下调 STIP1组中的细胞侵袭能力明显下降（*P＜0.05）如图 2-2。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R739.4

【参考文献】