【摘要】：目的观察雌激素对KM小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)后各缺血时间点神经功能评分、脑梗死体积及海马区神经元变化的影响;分析雌激素对KM小鼠MCAO后海马星形胶质细胞(AS)形态及数量的改变;探讨雌激素对小鼠脑缺血后海马AS上NF-κB p65、Bcl-2、Bax及Bcl-xl表达的影响。方法1选取171只健康成年雄性KM小鼠,按体重依次进行编码,依据数据随机表随机分为雌激素组(54只)、生理盐水组(54只)、假手术组(54只)及正常组(9只)。雌激素组术前7d每日定时腹腔注射17β-雌二醇溶液,生理盐水组术前7d每日注射0.9%生理盐水,之后两组均采用新式线栓法制作急性永久性右侧MCAO动物模型;假手术组仅结扎右侧颈总动脉(CCA);正常组不予特殊处理。处死前对各小鼠进行神经功能评分。2从各组术后各时间点取3只KM小鼠用于2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色,观察各组术后不同时间点脑缺血部位及体积改变。3除用于TTC染色的小鼠外,余小鼠麻醉后用4%多聚甲醛进行心脏灌注,取脑,切取前囟后-4.6mm至-2.6mm,即海马所在区域的脑片,制成蜡块后切片。4采用HE染色法观察并分析雌激素对小鼠各缺血时间点海马神经元细胞形态变化的影响。5采用免疫组织化学法观察分析雌激素对脑缺血后海马胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。6采用免疫组织荧光标记法观察分析雌激素对海马AS表达上NF-κB P65、Bcl-2、Bax与Bcl-xl的影响。6统计学方法:应用SPSS 21.0统计软件对实验数据进行统计学分析,计量资料以错误!未找到引用源。s表示,采用单因素方差分析,以P0.05为差异有统计学意义。结果1假手术组及正常组在指定时间内未出现神经功能缺损;雌激素组与生理盐水组小鼠随着缺血时间的延长,神经功能评分越高(F_E=36.217,P_E0.001;F_(NS)=20.429,P_(NS)0.001),缺血6h与12h时雌激素组神经功能评分与生理盐水组比较均有统计学差异(P0.05)。2正常组与假手术组术后各时间点小鼠TTC染色未见灰白色梗死灶;雌激素组与生理盐水组随着脑缺血时间的延长,梗死体积逐渐增大(F_E=634.108,P_E0.001;F_(NS)=56.367,P_(NS)0.001);相同缺血时间时,雌激素组脑梗死体积均小于生理盐水组(均P0.05)。3 HE染色结果显示生理盐水组比雌激素组海马区神经元较早出现不可逆损伤。4免疫组织化学结果显示正常组与假手术组各缺血时间点海马区GFAP阳性细胞数量均无明显差异(P0.05)。雌激素组及生理盐水组,随缺血时间的延长,缺血侧海马区GFAP的表达水平呈增长趋势(F_E=36.217,P_E0.001;F_(NS)=20.429,P_(NS)0.001);脑缺血72 h内,除脑缺血48h和72h海马DG区外,相同缺血时间点,雌激素组缺血侧海马区GFAP阳性细胞个数均高于同侧生理盐水组(P均0.05),且雌激素组突起更长,小分支较多。5相同缺血时间时,雌激素组GFAP与NF-κB P65共表达的细胞数量均少于生理盐水组,其中仅海马CA1区缺血24h、CA2区缺血12h及72h具有统计学差异(P0.05);相同缺血时间时,除缺血48h与72h时DG区外GFAP与Bcl-2共表达的细胞数量,雌激素组缺血侧海马各区共表达细胞数均高于生理盐水组(P0.05),且两组同时表达GFAP与Bcl-2阳性的细胞个数随着缺血时间的延长而增多(均P0.05);相同缺血时间时,比较两组GFAP与Bax共表达阳性的细胞数量,雌激素组仅海马CA1区缺血72h及CA2区缺血24h、72h低于同侧生理盐水组(P0.05);雌激素组与生理盐水组小鼠海马区Bcl-xl与GFAP同时阳性表达的细胞随着缺血时间的延长而增多(P均0.05),且相同缺血时间时,雌激素组海马CA1区缺血12h及CA3区和DG区缺血6h至72h共表达细胞数量均高于同侧生理盐水组(P0.05)。结论雌激素对小鼠MCAO有神经保护作用,可一定程度上减轻神经缺损症状,缩小脑梗死体积,延缓神经元不可逆损伤的发生;雌激素可促进小鼠MCAO后海马AS上GFAP的表达,促进突起的延长;雌激素可促进小鼠MCAO后海马区AS抗凋亡蛋白Bcl-2与Bcl-xl的表达,减轻脑损伤。
【图文】：
-G 依次代表正常组、假手术组术后 3h、假手术组术后 6h、假手术组术后 12h、假手术组术后 2术后 48h、假手术组术后 72h。图 1 正常组与假手术组小鼠 MCAO 后脑片 TTC 染色Fig.1 TTC staining of Mice brain in normal group and shame group after MCAO-F 依次表示雌激素组缺血 3h、6h、12h、24h、48h、72h；a-f 依次表示生理盐水组缺血 3h、6h、48h、72h。图 2 雌激素组与生理盐水组小鼠 MCAO 后脑片 TTC 染色Fig.2 TTC staining of Mice brain in estrgen group and saline group after MCAOA a CB bc D d Ee F
附录 A 图片注：A-G 依次代表正常组、假手术组术后 3h、假手术组术后 6h、假手术组术后 12h、假手术组术后 24h、假手术组术后 48h、假手术组术后 72h。图 1 正常组与假手术组小鼠 MCAO 后脑片 TTC 染色Fig.1 TTC staining of Mice brain in normal group and shame group after MCAOA B C DEFG
【学位授予单位】：华北理工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R743
【参考文献】
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2702171
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