朊蛋白的细胞膜定位与其构象转变关系的研究

发布时间：2020-06-10 17:30

【摘要】：本论文主要围绕朊蛋白(PrP)的构象转变开展相关工作,探究朊蛋白的细胞膜定位是否与其构象转变有关。 根据"Protein-only"学说,朊蛋白类疾病是因朊蛋白构象转变引起的疾病,目前该学说已经基本被证实。但是,体内正常朊蛋白PrPc是如何通过构象转变而成为致命的朊病毒prpSc的,关于其中的机理却知之甚少。根据前期研究结果,我们提出如下的朊蛋白构象转变模型：(1)朊蛋白与细胞脂膜的相互作用在这个过程中起到关键的作用；(2)细胞膜的脂筏区(Raft)存在抑制PrPc发生构象转变的因素,进而抑制了其发生构象转变。 为验证上述理论模型,设计如下实验：将正常情况下定位于细胞膜Raft区域的PrP分子移到Non-raft区域,然后检测Non-raft区域定位的PrP分子是否更容易转变成PrPSc。具体是用一段Qa穿膜区替代PrPc分子中的GPI锚,从而将PrPc分子从Raft区域移到Non-raft区域,并在PrP分子的1-230氨基酸残基和C端的Qa穿膜区之间插入一段高度灵活、易于弯曲的亲水Flag肽段,形成PrP(1-230)-Flag-Qa分子,增加其灵活性。 本实验在动物水平进行,建立了PrP(1-230)-3aa-Qa和PrP(1-230)-Flag-Qa两种转基因鼠,将两种转基因鼠分别与PrP敲除转基因鼠杂交,使其内源PrP敲除。筛选PrP(1-230)-3aa-Qa和PrP(1-230)-Flag-Qa分子可以在细胞内正常表达的品系,分别筛选到了有外源PrP(1-230)-3aa-Qa转基因表达的小鼠品系1株(On15)和有外源PrP(1-230)-Flag-Qa转基因表达的小鼠品系2株(Flag6和Flag11),并对其进行了脑部朊病毒感染实验,后续需要观察转基因鼠发病情况,记录病症潜伏期等。该实验的顺利完成,将有助于回答朊蛋白类疾病发病机理的核心问题,即朊蛋白是如何从PrPc转变成prpSc的。
【图文】：

图1. PrP膜定位示意图。左侧为体内正常表达的PrP分子，含有GPI描。中间为Pr0)-3aa-Qa分子：用Qa蛋白分子的穿膜丨X:代替野生型PrP分子C端的GP1锚定信号。2

之后的全部序列。在pMoXho质粒的第二外显子和第三外显子之间插入moPrP-Qa或moPrP-Flag-Qa 序列，，构成 pMoXho-PrPQaonly 或 pMoXho-PrPQaFlag 质粒。pMoXho-PrPQaonly 或 pMoXho-PrPQaFlag 质粒示意图如图 1.1 所示。
【学位授予单位】：华东师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R741

【共引文献】

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本文编号：2706617