硫化氢通过上调瘦素信号通路拮抗甲醛诱导的HT22细胞衰老

发布时间：2017-03-28 00:04

  本文关键词：硫化氢通过上调瘦素信号通路拮抗甲醛诱导的HT22细胞衰老，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：【研究背景与目的】大量研究证实甲醛(Formaldehyde,FA)对中枢神经系统具有毒性作用。硫化氢(Hydrogen sulfide,H2S),作为一种神经保护剂,我们发现其可以抑制FA诱导的神经细胞凋亡、细胞毒性及内质网应激,表明H2S具有抗FA神经毒性的作用,但其具体机制有待进一步研究。神经细胞衰老在神经退行性疾病的病理生理机制中具有重要地位,我们推测细胞衰老在FA神经毒性中具有重要价值。瘦素(leptin)具有中枢神经系统保护作用,我们既往发现H2S可以通过上调leptin信号通路拮抗槟榔碱引起的PC12细胞凋亡、内质网应激从而发挥神经保护作用。因此,在本研究中,我们拟探讨细胞衰老是否参与了FA导致的神经毒性?H2S可否拮抗FA诱导的HT22细胞衰老?以及leptin信号通路可否介导H2S的这一作用?【方法】细胞计数试剂盒(Cell counting Kit-8,CCK8)法检测细胞活力;β-半乳糖苷酶染色(Senescence Associated acidic-β-Galactosidas,SA-β-Gal)法检测衰老细胞;台盼蓝计数法检测细胞生长情况并绘制细胞生长曲线;蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测leptin、lepRb以及细胞衰老相关蛋白p16INK4a和p21CIPl的表达;ELISA法检测HT22细胞培养上清液中leptin的含量。【结果】1.FA(100,200μM)处理HT22细胞48 h可显著降低HT22细胞的细胞活力,在HT22细胞上验证了FA的神经细胞毒性。2.FA(50,100,200μM,48 h)能明显增加HT22细胞SA-β-Gal染色阳性率、上调细胞衰老相关蛋白(p16INK4a和p21CIPL)的表达、抑制HT22细胞生长,表明FA可诱导HT22细胞衰老。3.预处理NaHS(H2S的供体,400μM,30 min)可明显抑制FA诱导的HT22细胞活力下降,在HT22细胞上验证了H2S的抗FA神经细胞毒性作用。4.NaHS(400μM,30 min)预处理能明显逆转FA(100μM,48 h)诱导的HT22细胞SA-β-Gal染色阳性率增加、p16INK4a及p21CIP1蛋白表达增加、细胞生长抑制,表明H2S可拮抗FA诱导的HT22细胞衰老。5.FA(50,100,200μM,48 h)可浓度依赖性地下调HT22细胞中leptin及lepRb蛋白表达、降低细胞培养上清液中leptin的含量,提示FA的神经毒性与其抑制leptin信号通路有关。6.NaHS(100,200,400μM,48 h)可浓度依赖性的增加HT22细胞leptin、lepRb表达及培养上清液中leptin的含量,且预处理NaHS(400μM,30 min)可明显逆转FA对leptin信号通路的下调,提示H2S抗神经细胞衰老可能与其上调leptin信号通路有关。7.预处理leptin tA(leptin信号通路抑制剂,50 nM)能取消NaHS对FA诱导HT22细胞活力下降以及细胞衰老的拮抗作用,表明leptin信号通路介导了H2S抗FA诱导的HT22细胞衰老。【结论】1.FA可以诱导HT22细胞衰老;2.H2S可拮抗FA诱导的HT22细胞衰老;3.leptin信号通路介导H2S抗FA诱导的HT22细胞衰老。
【关键词】：硫化氢 甲醛 细胞衰老 leptin信号通路
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R741
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-12
• 第一章 绪论12-16
• 第二章 材料与方法16-22
• 1. 主要仪器和试剂16-18
• 2. 药品与试剂的配制18-19
• 3. 实验方法19-22
• 第三章 结果22-34
• 1. 甲醛 (Formaldehyde, FA) 可降低HT22细胞活力22
• 2. FA可诱导HT22细胞衰老22-24
• 3. H_2S可抑制FA降低的HT22细胞活力下降24
• 4. H_2S拮抗FA诱导的HT22细胞衰老24-26
• 5. H_2S上调HT22细胞leptin信号通路26-29
• 6. 阻断leptin信号通路可逆转H_2S对FA诱导HT22细胞衰老的拮抗作用29-34
• 第四章 讨论34-38
• 第五章 实验结论38-40
• 参考文献40-44
• 文献综述 瘦素与阿尔兹海默病44-52
• 参考文献47-52
• 硕士期间发表的论文52-54
• 致谢54

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