交感神经对偏头痛大鼠三叉神经节内TNF-α表达的影响
发布时间：2020-06-19 14:54
【摘要】：目的:为了研究交感神经对硝酸甘油(nitroglycerin,NTG)致慢性偏头痛模型大鼠疼痛行为学和三叉神经节(trigeinal ganglion,TG)内炎性因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响,进而探讨交感神经对偏头痛的作用机理,为偏头痛的治疗提供理论依据。方法:1、将24只雄性SD大鼠随机分为偏头痛模型组(n=8)、空白对照组(n=8)和生理盐水对照组(n=8),模型组大鼠予颈背部皮下注射NTG(10mg/Kg,每周1次,共4周),生理盐水组予注射0.9%的生理盐水(用法用量同模型组),空白对照组不做任何处理;观察并记录各组大鼠每次给药30min内疼痛行为学症状,第4周给药4h后取材进行免疫荧光染色实验,研究各组大鼠TG内TNF-α表达情况。2、将40只雄性SD大鼠随机分为生理盐水对照组(n=10)、偏头痛模型组(n=10)、交感神经切断组(n=10)和假手术组(n=10),首次给药造模24~48h后,交感神经切断组大鼠行颈交感神经切断术,假手术组大鼠按照同样步骤行假手术但不切断颈交感神经;观察并记录第2周给药30min内疼痛行为学症状,第4周给药4h后取材进行免疫荧光染色和Western-blot实验,研究交感神经切断对大鼠疼痛行为学和TG内TNF-α表达水平的影响。结果:1、硝酸甘油致慢性偏头痛模型大鼠的疼痛行为学评分显著高于两个对照组(P0.01)。TNF-α在模型组大鼠TG中呈强阳性表达,而在空白对照组和生理盐水对照组大鼠TG中TNF-α呈弱阳性表达;通过测平均荧光强度进行分析可见,模型组与空白对照组或生理盐水对照组相比,平均荧光强度显著增高(P0.01),而两个对照组之间未见明显统计学差异(P0.05)。2、交感神经切断组大鼠疼痛行为学评分较模型组降低(P0.01),但仍比对照组评分高(P0.01),而假手术组大鼠疼痛行为学评分与模型组无明显差异(P0.05)。免疫荧光染色及Western-blot实验结果均显示,交感神经切断组大鼠三叉神经节内TNF-α表达水平较模型组是显著降低的(P0.01),与对照组相比则偏高(P0.05)。假手术组大鼠三叉神经节内TNF-α表达量与模型组之间无统计学差异(P0.05)。结论:1、NTG致偏头痛大鼠的疼痛行为学评分明显升高,提示该模型能较好地模拟偏头痛发作及慢性化的过程。TNF-α在偏头痛大鼠TG内表达显著增多,进一步支持神经源性炎症参与了偏头痛的致病过程。2、颈交感神经切断可缓解NTG致慢性偏头痛模型大鼠的疼痛行为,同时降低偏头痛大鼠三叉神经节内TNF-α的表达量,说明交感神经可通过调控偏头痛大鼠的TNF-α表达水平,进而影响偏头痛。
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R747.2
【图文】：
Figure 2-1. Experimental technical routes.图 2-1 实验技术路线2.2.2 偏头痛模型的建立及疼痛行为学评估本研究按 Tassorelli 法[36]在大鼠颈背部注射硝酸甘油（10mg/Kg，即 2ml/Kg，每周 1 次，共 4 周），建立慢性偏头痛模型，此为模型组。生理盐水对照组按照同样的剂量和方法注射生理盐水，空白对照组不做任何处理。给药后观察各组大鼠行为学变化情况，记录每次给药后 30min 内大鼠是否有耳红现象，挠头、爬笼次数等。行为学评分标准[37]如下： 挠头：达 10 次计 1 分，此后每出现 1 次累计 0.1 分； 爬笼：达 3 次计 I 分，此后出现 1 次，累计 1 分； 笼内打转：达 2 次计 1 分，此后每出现 1 次累计 1 分；④往返运动：每次计 1 分；⑤咬尾：每次计 1 分；⑥耳朵发红：出现计 1 分。潜伏期 5min 后疼痛评分累计≥6 分的大鼠可视为造模成功。2.2.3 心脏灌注及取材 麻醉：第四周给药 4h 后，给大鼠腹腔注射 10%的水合氯醛溶液（4ml/Kg），
广东药科大学硕士研究生学位论文肌等，小心地分离右侧气管和颈动脉鞘，避免损伤血管，在颈动脉鞘后间隙的肌肉表面横向剪断交感神经干，逐层缝合切口、消毒皮肤，将大鼠单独放置于清洁且温暖的笼子里，待其自然清醒。观察大鼠清醒后情况，若出现右侧眼睑下垂，即 Horner 征，说明手术成功，只有出现右侧眼睑下垂的大鼠才纳入后续的实验。sham 组大鼠按照同样的手术步骤，分离右侧气管和颈动脉鞘，但不切断交感神经干。手术过程中所有器械均经过严格的高温高压灭菌消毒处理，按照实验动物伦理规范进行操作。Step 3 疼痛行为学评估：继续按计划给药，观察各组大鼠行为学变化情况，记录每次给药后 30min 内大鼠是否有耳红现象，挠头、爬笼次数等。行为学评分标准[45]如下： 挠头：达 10 次计 1 分，此后每出现 1 次累计 0.1 分； 爬笼：达 3 次计 1 分，此后出现 1 次，累计 1 分； 笼内打转：达 2 次计 1 分，此后每出现 1 次累计 1 分；④往返运动：每次计 1 分；⑤咬尾：每次计 1 分；⑥耳朵发红：出现计 1 分。潜伏期 5min 后疼痛评分累计≥6 分的大鼠可视为造模成功。
本文编号：2720944
【学位授予单位】：广东药科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R747.2
【图文】：
Figure 2-1. Experimental technical routes.图 2-1 实验技术路线2.2.2 偏头痛模型的建立及疼痛行为学评估本研究按 Tassorelli 法[36]在大鼠颈背部注射硝酸甘油（10mg/Kg，即 2ml/Kg，每周 1 次，共 4 周），建立慢性偏头痛模型，此为模型组。生理盐水对照组按照同样的剂量和方法注射生理盐水，空白对照组不做任何处理。给药后观察各组大鼠行为学变化情况，记录每次给药后 30min 内大鼠是否有耳红现象，挠头、爬笼次数等。行为学评分标准[37]如下： 挠头：达 10 次计 1 分，此后每出现 1 次累计 0.1 分； 爬笼：达 3 次计 I 分，此后出现 1 次，累计 1 分； 笼内打转：达 2 次计 1 分，此后每出现 1 次累计 1 分；④往返运动：每次计 1 分；⑤咬尾：每次计 1 分；⑥耳朵发红：出现计 1 分。潜伏期 5min 后疼痛评分累计≥6 分的大鼠可视为造模成功。2.2.3 心脏灌注及取材 麻醉：第四周给药 4h 后，给大鼠腹腔注射 10%的水合氯醛溶液（4ml/Kg），
广东药科大学硕士研究生学位论文肌等，小心地分离右侧气管和颈动脉鞘，避免损伤血管，在颈动脉鞘后间隙的肌肉表面横向剪断交感神经干，逐层缝合切口、消毒皮肤，将大鼠单独放置于清洁且温暖的笼子里，待其自然清醒。观察大鼠清醒后情况，若出现右侧眼睑下垂，即 Horner 征，说明手术成功，只有出现右侧眼睑下垂的大鼠才纳入后续的实验。sham 组大鼠按照同样的手术步骤，分离右侧气管和颈动脉鞘，但不切断交感神经干。手术过程中所有器械均经过严格的高温高压灭菌消毒处理，按照实验动物伦理规范进行操作。Step 3 疼痛行为学评估：继续按计划给药，观察各组大鼠行为学变化情况，记录每次给药后 30min 内大鼠是否有耳红现象，挠头、爬笼次数等。行为学评分标准[45]如下： 挠头：达 10 次计 1 分，此后每出现 1 次累计 0.1 分； 爬笼：达 3 次计 1 分，此后出现 1 次，累计 1 分； 笼内打转：达 2 次计 1 分，此后每出现 1 次累计 1 分；④往返运动：每次计 1 分；⑤咬尾：每次计 1 分；⑥耳朵发红：出现计 1 分。潜伏期 5min 后疼痛评分累计≥6 分的大鼠可视为造模成功。
【参考文献】
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2 郎海丽;颈交感神经干离断对糖尿病大鼠T淋巴细胞亚群及IL-2、IL-6、TNF-α的影响[D];南昌大学医学院;2015年
本文编号：2720944
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