α-突触核蛋白介导的氧化应激在帕金森病中的作用及其机制的研究

发布时间：2020-06-20 18:44

【摘要】：帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是继阿尔茨海默病之后第二常见的神经退化性性疾病,中老年人多发。PD与年龄因素相关,发病率随着人的年龄增长而升高。流行病学调查研究显示,PD全球患病率约为0.3%,65岁以上患病率约为2%,85岁以上老年人群患病率约为5%。在PD的患病人群中,按照其致病机制,可分为遗传性和散发性,遗传性PD只占5%—10%,非遗传性PD即散发性PD达90%的,至今PD的病因尚不明确。PD典型临床症状包括静止性震颤、肌僵直、运动迟缓和姿势平衡障碍等。PD给患者家庭及社会带来很大负担,目前现有药物和手术治疗非常有限,只能部分改善临床症状,不能延缓PD疾病的进展,PD症状会随逐渐加重,直至丧失运动功能,患者生活不能自理,严重影响了生活质量,最终患者会因诸多并发症而离世。随着社会老龄化人口的增高,帕金森病的发病率也逐年增高,将成为21世纪威胁人类生命的最严重疾病之一。PD的经典病理改变主要是中脑黑质致密部含有黑色素的多巴胺能神经元(dopaminergic neurons,DN)选择性变性、缺失以及残存的神经元内以α-突触核蛋白(α-Synuclein,α-Syn)为主要成分的路易小体(Lewy bodies,LB)形成。鱼藤酮是一种常见的线粒体复合物I抑制剂,被广泛应用于制备环境毒素PD模型。目前认为α-Syn寡聚体的细胞毒性作用是导致DN变性、缺失的重要原因,但其中具体生物学机制尚不完全清楚。本研究准备经低剂量鱼藤酮持续灌胃构建PD小鼠模型,以期能进一步研究α-Syn寡聚体导致DN变性丢失的可能生物学机制。目的:通过鱼藤酮持续灌胃处理构建出帕金森病小鼠模型,以此研究α-突触核蛋白寡聚体的毒性作用机制。方法:将48只老年雄性C57小鼠随机分为鱼藤酮组和对照组,每组24只,鱼藤酮组灌注0.01 mL/g鱼藤酮氯仿混合溶液,对照组灌注同体积的氯仿混合溶液,均连续灌胃12周。于灌胃前、后取小鼠中脑,透射电镜观察中脑黑质神经元超微结构,免疫组化染色观察黑质部位酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)阳性细胞密度,行蛋白质印迹实验检测α-Syn表达水平,检测脑组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量。结果:灌胃12周后,透射电镜显示鱼藤酮组小鼠黑质部可见线粒体、高尔基体不规则肿胀。免疫组化染色显示鱼藤酮组中TH阳性细胞数量较对照组明显减少(P0.05)。Western blot显示鱼藤酮组中脑α-Syn的表达较对照组明显增多(P0.05)。鱼藤酮组SOD、GSH-PX含量较对照组明显下降(P0.05),MDA含量较对照组显著增多(P0.05)。结论:小剂量鱼藤酮持续灌胃可在脑内诱发形成α-Syn寡聚体,α-Syn寡聚体可能经氧化应激途径导致多巴胺神经元损伤。
【学位授予单位】：长江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R742.5
【图文】：

应时间 5 min，待测样本蛋白浓度 mgprot/L）。析7.0 软件处理数据。符合正态分布以及方差齐性的比较采用独立样本均数 t 检验；P＜0.05 为差异有3 结果小鼠行为异常鼠在灌胃7周左右时，开始出现震颤、爬行缓慢、自外界刺激反应迟钝等症状。直至鱼藤酮灌胃12周数量随着时间延长不断增加，且症状更明显。而小鼠黑质病变示，灌胃 12 周后对照组黑质部胞内细胞器未见肿的线粒体、高尔基体均可见明显不规则肿胀，见图

第二章 研究报告酮导致多巴胺能神经元变性缺失组织化学染色显示，灌胃前，鱼藤酮组和对照组小鼠中脑黑别为 25.15±1.63、24.70±1.69，两者并无统计学差异（P=，鱼藤酮组和对照组小鼠中脑黑质处 TH 阳性细胞数分别为 2.17，鱼藤酮组较对照组明显减少，差异有统计学意义（P =0.00

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