miR-422a通过靶向SMOC1对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

发布时间：2020-07-04 04:02

【摘要】：目的:探究miR-422a在U251细胞氧糖剥夺再灌注后对SMOC1及TGF信号通路的影响。方法:随机将人神经胶质细胞瘤株U251分为5组,分别设为正常对照组,以及氧糖剥夺1小时后再灌注不同时间的4组。各组U251细胞用MTT比色法、流式双染法检测细胞凋亡情况,用Real-time PCR检测miR-422a与SMOC1的mRNA表达,WB检测SMOC1的蛋白情况;用双荧光素酶报告基因共转染检测miR-422a对SMOC1-3’UTR的直接调控作用;分为正常对照组,试剂对照组及miR-422a过表达组3组,在氧糖剥夺1小时后再灌注24h时,用MTT比色法测细胞活性,流式双染法检测各组的凋亡率,WB检测SMOC1、TGF-β1、ALK1/5蛋白的表达。结果:1.OGD/R细胞凋亡的变化:细胞活性呈先下降再上升的表达变化,OGD/R24h组的细胞活性明显下降,达到谷值,差异具有显著性(P0.01);细胞凋亡率则反之,表现为先上升再降低的变化趋势,在OGD/R24h达到峰值(P0.01);2.miR-422a mRNA的表达变化:OGD/R后miR-422a mRNA的表达先下调再上调,OGD/R24h miR-422a mRNA明显降低,达到谷值(P0.01);3.SMOC1的表达变化:SMOC1 mRNA在OGD/R后呈现为先下调再上调的变化趋势,在OGD/R24h达到谷值(P0.01);SMOC1蛋白表达变化同mRNA基本一致;4.上调miR-422a后SMOC1蛋白显著下降,有显著性差异(P0.01)。双荧光素酶报告基因共转染验证试验结果显示miR-422a显著抑制SMOC1(荧光比值为56.71%)。5.miR-422a过表达组与试剂对照组、正常对照组比,氧糖剥夺再灌注24小时的miR-422a与SMOC1表达、细胞活性以及TGF-β1、ALK1明显升高(P0.01),ALK5稍升高(P0.05),而细胞凋亡率明显降低(P0.01)。结论:miR-422a可能在氧糖剥夺再灌注过程中发挥神经保护作用,其可能与靶向SMOC1激活TGF-β1/ALK1信号通路有关。
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R743
【图文】：

示意图,示意图,培育箱,饱和湿度

miR-422a 过表达组。（4）将培养板置于内部温度 37 摄氏度且为饱和湿度、并碳和 95%空气的培育箱中进行培养，培养 6h 后，小心摒弃含有转基，更替成完全新鲜的培养基，继续培养 24-96h 后，继续进行下2.2.5.3 荧光素酶检测 miR-422a 和 SMOC1 基因 3’UTR 质粒的相

细胞活性,再灌注,情况,对照组

(P>0.05 )；再灌注 12 小时与正常组比较，细胞活性明显下降(P<0.05)；再灌4 小时细胞活性明显下降(P<0.01)，此时已达到谷值；再灌注 48 小时，细胞较再灌注 24 小时有所升高，与正常组比较具有统计学意义(P<0.01)。（见表，表 3-2，图 3-1，图 3-2）表 3-1 U251 细胞 OGD/R 后不同时间的细胞活性情况生长时间对照组 OGD/R 组0h 1.519±0.023 1.500±0.02512h 1.553±0.076 1.249±0.109*24h 1.563±0.074 0.869±0.086**48h 1.554±0.034 0.986±0.110**注：OD 值，与对照组相比，*：P<0.05，**：P<0.01

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