长链非编码RNA在缺血性脑卒中的临床价值及其在卒中后免疫抑制的分子机制研究

发布时间：2020-07-14 23:29

【摘要】：第一章长链非编码RNA在急性缺血性脑卒中的表达谱及其临床价值研究目的:长链非编码RNAs(long noncoding RNAs,lncRNAs)在缺血性脑卒中(ischemic stroke,IS)的发生发展过程中发挥至关重要的作用,本研究旨在探讨急性IS患者的外周血单个有核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中lncRNAs的表达特征及其作为IS诊断标志物的临床价值。方法:本研究纳入四个独立队列,包括206例急性缺血性脑卒中、179例健康志愿者和55例短暂性脑缺血发作(transient ischemic attack,TIA)。lncRNA微阵列芯片筛选PBMCs中差异表达的lncRNAs,并通过qRT-PCR进行后续的样本验证,利用logistic回归构建了lncRNAs的联合诊断指数combination index。结果:1.lncRNA微阵列芯片分析显示在缺血性脑卒中患者中有70个上调的lncRNAs和128个下调的lncRNAs(fold-chang2,P0.05)。2.qRT-PCR结果显示在缺血性脑卒中linc-DHFRL1-4、SNHG15和lincFAM98A-3的表达水平是高于短暂性脑缺血发作和健康人群的(P0.05)。3.纵向随访分析显示缺血性脑卒中的linc-FAM98A-3在第7天恢复到正常人水平(P0.05),SNHG15在90天后仍然高于健康对照组(P0.05)。4.ROC曲线分析显示lncRNAs的联合诊断指数combination index在诊断缺血性脑血管疾病时是优于单个lncRNA和血清BDNF及NSE,且AUC均大于0.84(P0.05)。5.lncRNAs的联合诊断指数combination index与缺血性脑卒中的神经功能缺损的严重程度密切相关(r=0.427,P0.001)。结论:lncRNAs的差异表达与缺血性脑血管疾病密切相关,可作为一个新的潜在诊断方法。第二章长链非编码RNA SNHG15在卒中后免疫抑制中的作用及其分子机制研究目的:本研究旨在探讨长链非编码RNA(long noncoding RNA)SNHG15在卒中后免疫抑制中的作用及其分子机制。方法:通过磁珠分选、荧光定量PCR(q RT-PCR)以及免疫荧光分析SNHG15在缺血性脑卒中PBMCs各细胞中的表达情况;RNA pull-down和RNA免疫共沉淀检测SNHG15与p-STAT6蛋白的结合能力,随后Western blot分析SNHG15对STAT6磷酸化的作用;ELISA及q RT-PCR检测SNHG15对细胞因子的影响;最后,利用q RT-PCR、荧光素酶基因报告实验和CHIP检测p-STAT6与SNHG15启动子区的结合能力。结果:1.SNHG15在缺血性脑卒中的单核巨噬细胞中明显高表达(P0.001)。2.SNHG15可与p-STAT6相互作用,并促进STAT6的磷酸化作用。3.SNHG15过表达可部分抑制LPS诱导巨噬细胞向M1型转化,降低SNHG15可部分抑制IL-4诱导的巨噬细胞向M2型转化。4.p-STAT6入核后与SNHG15启动子区(~842-~856)结合,促进SNHG15的转录。结论:SNHG15在单核巨噬细胞中通过促进p-STAT6的合成参与调控巨噬细胞的极化,并且入核后的p-STAT6与SNHG15的启动子区结合,进一步促进SNHG15的表达,从而促进巨噬细胞向M2型分化。
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R743.3
【图文】：

候选lncRNAs筛选及验证流程

为了筛选出与急性缺血性脑卒中有关的 lncRNAs，本研究采用“HumanLncRNA Array v4”分析 5 对缺血性脑卒中和健康对照组的外周血单个有核细胞中的lncRNAs表达谱，结果显示差异表达两倍以上的lncRNAs有198个（图1.3），其中有 70 个 lncRNAs 上调，128 个 lncRNAs 下调，详细见表 1.11。图 1.3 缺血性脑卒中 PBMCs 中差异表达的 lncRNAs注：A 5 对缺血性脑卒中和健康对照组筛选出差异表达的 lncRNAs 绘制的热图，红色代表上调，绿色代表下调；B 散点图显示有 70 个 lncRNAs 上调，128 个 lncRNAs 下调；C 火山图。表 1.11 lncRNAs 芯片筛选出的差异表达的 lncRNAs（fold change>2; P<0.05）NO. Regulation lncRNA ID Gene Symbol Chromosome Strand Start End1 up TCONS_00007196 linc-DHFRL1-4 3 - 96335998 963370602 up ENST00000576489.1 MIR22HG 17 - 1615873 1619504

NAs 微阵列芯片（A）和 qRT-PCR（B）检测 5 个 lncR1,***P<0.001. IS, ischemic stroke; HC, healthy control.的筛选和验证 8 个上调的候选 lncRNAs，本研究通过 qRT-PCR照组的 PBMCs 中进一步检测它们的表达水平。性脑卒中后明显差异表达（P<0.05）（图 1.5A）；性脑卒中患者中进行分析，发现 3 个 lncRNA（slc-FAM98A-3）在经过治疗后明显下调（P<0.05）（

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本文编号：2755644