纤溶酶敏感水凝胶微球的制备及其对外周神经修复的作用

发布时间：2020-07-19 03:23

【摘要】：目的:本文通过体内纤溶酶浓度的动态变化,设计制备了载NGF的纤溶酶敏感微球,并以神经导管为支架,构建良好的外周神经修复环境,为周围神经系统的修复提供实验依据。方法:通过取代反应将纤溶酶敏感多肽和ACRL-PEG-NHS合成纤溶酶敏感多肽水凝胶单体材料,MALDI-TOF检测结果;通过酰氯酯化法合成对照的PE.GDA水凝胶单体材料,经l+核磁共振谱(1H-NMR)分析其结构及酯化率;分别测量NGF在两相中的分配系数(水凝胶材料相/葡聚糖相);通过双水相乳化法制备两种不同的水凝胶微球并对其进行形态学及体外表征;W/O/W法制备PLGA缓释微球并与水凝胶微球作对照;三种微球都进行体外释放实验;将PC12细胞与微球NGF释放液共培养,根据PC12细胞长出轴突的分化率来评价NGF的生物活性;溶剂挥发法制备PLA神经导管;建立大鼠坐骨神经模型,用微球复合入导管桥接坐骨神经断端,观察坐骨神经恢复情况。结果:合成的纤溶酶敏感多肽水凝胶单体分子量主要集中在8194,产率高达94.82%;PEGDA经l+核磁共振谱(1H-NMR)分析,平均产率为(76.02±1.22)%,平均酯化率为(77.05±3.44)%;纤溶酶敏感水凝胶材料的两相分配系数为28.7%,PEGDA水凝胶材料的两相分配系数为30.7%;采用双水相乳化法制备的两种水凝胶微球外形圆整,其中纤溶酶敏感微球的平均粒径为38.9±16.7μm,微球包封率和载药量分别为25.73%和0.0029%;PEGDA水凝胶微球,平均粒径为32.5±18.6μm,包封率为19.21%,载药量为0.0028%;PLGA缓释微球的平均粒径为14.9±16.1μm,微球的包封率为86.23%,载药量为0.012%,体外释放曲线符合Higuchi方程(Q=0.0228t1/2+0.0138,R2=0.9984);纤溶酶水凝胶微球体外释放实验显示在1d内累计释放率为55.90%,存在一定的突释效应,在第五天累计释放率达 88.20%,缓释曲线符合 Higuchi 方程,Q=0.0926t1/2-0.0629,R2=0.9914;在纤溶酶酶敏感微球4h的NGF的释放液中,PC12细胞的分化率为74.21%,在7d时分化率为45.68%,而PC12细胞的分化率在PLGA微球3h的NGF释放液中为71.25%,在7d时分化率为29.35%。PLA神经导管拉伸强度为2.08±0.36MPa,拉伸伸长率为(257.6±53.22)%。术后一个月,体内动物实验发现各组导管内坐骨神经发生不同程度的再生,均未完全吻合,导管中间有部分细胞组织的迁移,神经再生已经启动。结论:本文通过酰氯酯化法合成的PEGDA水凝胶单体材料酯化率较高,并合成了纯度较高的纤溶酶敏感水凝胶单体材料,两种材料所形成的水凝胶都有较好的溶胀性;制备的ACRL-PEG-peptide-PEG-ACRL纤溶酶敏感微球和PEGDA水凝胶微球都有较好的缓释性能,相比于PEGDA水凝胶微球,前者具有较好的纤溶酶敏感性,能根据纤溶酶的浓度而控制释药量;双水相乳化法制备的载NGF的微球比采用W/O/W乳化溶剂挥发法制备的微球更易保持NGF的活性。
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R318.08;R745
【图文】：

核磁共振谱图,磁共振谱,化学位移

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核磁共振谱图,化学位移

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水凝胶,形态,毛细管

－－．３０ｓ，待完全溶解后，分别向其中放入内径１ｍｍ的毛细管，再向其中加入ｌＰＳ邋溶液（５０ｍｇ／ｍｌ）和邋５００邋的邋ＴＥＭＥＤ邋溶液（２０％，ｐＨ７．４），交联反将毛细管取出，置于丙酮中浸泡润湿２天后，取出毛细管中的凝胶柱。逡逑水凝胶溶胀率的测定逡逑将制备的两种水凝胶常温干燥１天，称重，并测量干凝胶柱的长度和质量ｍ、长度１、直径ｄ。将干燥的凝胶柱置于３ｍｌ的ＰＢＳ缓冲液中，出，迅速用滤纸吸取外部水分，称重，记为Ｍ，测量长度Ｌ、直径Ｄ。率和体积溶胀率的公式：逡逑质量溶胀率＝（Ｍ—ｍ）／ｍｘｌ0０％逡逑体积膨胀率＝（ＬＤ２－ｌｄ２）／ｌｄ２ｘ邋１００％逡逑结果逡逑

【参考文献】