Jurkat细胞内miR-125a-5p与Foxp3及miR-548k与CXCL13相互作用的研究与重症肌无力发病的关系

发布时间：2017-03-30 04:17

  本文关键词：Jurkat细胞内miR-125a-5p与Foxp3及miR-548k与CXCL13相互作用的研究与重症肌无力发病的关系，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分Jurkat细胞体外培养、转染及其总RNA提取、测定目的Jurkat细胞(CD4+T细胞)体外培养并以miR-125a-5p 和 miR-548k的模拟物和抑制物分别转染jurkat细胞,提取细胞总RNA并测其浓度、纯度,为后期实验做好充分准备。方法Jurkat细胞接种于RPMI-1640培养基中,于含5%CO2的37℃恒温培养箱中培养。将对数生长期细胞以106/mL的浓度接种于6孔板中,分别转染阴性对照模拟物、miR-125a-5p(或miR-548k)的模拟物、阴性对照抑制物及miR-125a-5p(或miR-548k)的抑制物。TRIzol法分提取细胞总RNA。结果Jurkat细胞在培养基中抱团悬浮生长,且生长旺盛,2～3天即传代,传至4～5代后,即可用于后续实验。细胞转染后,细胞生长状态好、生长旺盛。提取的总RNA浓度控制在300～500 ng/ul泛围内；总RNA的A260/A280比值一般在1.8～2.0范围内。结论1、Jurkat细胞适合用于本实验的后续研究。2、本研究所提的总RNA浓度适宜,质量好,有利于后续实验的进行。第二部分Jurkat细胞内miR-125a-5p 与 Foxp3相互作用的研究及与重症肌无力发病的关系目的本研究利用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测转染后细胞中miR-125a-5p、Foxp3 mRNA及蛋白的表达量,证明miR-125a-5p对其靶基因Foxp3的调控关系。方法荧光定量PCR法检测miR-125a-5p及Foxp3 mRNA的相对表达。蛋白免疫印迹法测Foxp3蛋白的相对表达水平。结果1.MiRNA荧光定量PCR结果显示,相比模拟物阴性对照组,miR-125a-5p模拟物组的miRNA表达显著上调,相比抑制物阴性对照组,miR-125a-5p抑制物组的1miRN A表达显著下降。2.MRNA荧光定量PCR结果显示,相比模拟物阴性对照组,miR-125a-5p模拟物组的mRNA表达明显下降,相比抑制物阴性对照组,IniR-125a-5p抑制物组的mRNA表达明显升高。3.Western blotting结果显示,相比模拟物阴性对照组,miR-125a-5p模拟物组的Foxp3蛋白表达减少,相比抑制物阴性对照组,miR-125a-5p抑制物组的Foxp3蛋白表达增加。结论1、MiR-125a-5p参与调节jurkat细胞内Foxp3的转录后表达。2、Jurkat细胞内1miR-125a-5p通过转录后基因沉默机制调控靶基因Foxp3 mRNA表达降低,从而降低Foxp3蛋白表达。第三部分Jurkat细胞内miR-548k与CXCL13相互作用的研究及与重症肌无力发病的关系目的本研究利用荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞中miR-548k. CXCL13mRNA及细胞培养液中CXCL13蛋白的表达,证明miR-548k对其靶基因CXCL13的调控关系。方法荧光定量PCR法检测转染后细胞中niR-548k 及 CXCL13 mRNA的相对表达。酶联免疫吸附试验(ELISA)法,测细胞培养液中CXCL 13蛋白的表达水平。结果1.MiRNA荧光定量PCR结果显示,miR-548k模拟物组的miRNA表达比模拟物阴性对照组显著上调,miR-548k抑制物组的miRNA表达比抑制物阴性对照组显著下降。2.MRNA荧光定量PCR结果显示,与模拟物阴性对照组比,miR-548k模拟物组的mRNA表达明显下降,与抑制物阴性对照组比,miR-548k抑制物组的mRNA表达明显升高。3.ELISA结果显示,miR-548k模拟物组的CXCL13表达较模拟物阴性对照组减少,miR-548k抑制物组的CXCL13表达较抑制物阴性对照组增加。结论1、miR-548k参与调节jurkat细胞内CXCL13的转录后表达。2、Jurkat细胞内miR-548k通过转录后基因沉默机制调控靶基因CXCL13 mRNA,使其表达降低,从而降低CXCL13蛋白表达。
【关键词】：重症肌无力 Jurkat细胞 miR-125a-5p-Foxp3 miR-548k CXCL13
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R746.1
【目录】：

• 个人简历3-6
• 中英文缩写对照表6-8
• 中文摘要8-11
• 英文摘要11-14
• 前言14-16
• 第一部分 Jurkat细胞体外培养、转染及其总RNA提取、测定16-30
• 1. 研究目的16
• 2. 材料与方法16-23
• 3. 结果23-27
• 4. 讨论27-29
• 5. 结论29-30
• 第二部分 Jurkat细胞内miR-125a-5p与Foxp3相互作用的研究及与重症肌无力发病的关系30-46
• 1.研究目的30
• 2.材料与方法30-39
• 3.结果39-42
• 4.讨论42-45
• 5.结论45-46
• 第三部分 Jurkat细胞内miR-548k与CXCL13相互作用的研究及与重症肌无力发病的关系46-58
• 1.研究目的46
• 2.材料与方法46-52
• 3.结果52-54
• 4.讨论54-57
• 5.结论57-58
• 参考文献58-63
• 综述63-71
• 参考文献68-71
• 致谢71-73
• 攻读学位期间发表的学术论文目录73

【参考文献】

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1 杜伟伟;重症肌无力伴胸腺瘤患者胸腺内microRNA-125a-5p对FOXP3基因表达调控的初步研究[D];广西医科大学;2014年

  本文关键词：Jurkat细胞内miR-125a-5p与Foxp3及miR-548k与CXCL13相互作用的研究与重症肌无力发病的关系，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：276215