联合靶向PI3Kβ和MLK3对胶质母细胞瘤细胞增殖的协同调控作用研究

发布时间：2020-07-26 08:05

【摘要】：目的:证明MLLK3在胶质母细胞瘤中发挥作用,探讨单独及联合靶向PI3Kβ和MLK3对胶质母细胞瘤细胞增殖的影响。方法:首先通过western blot研究MLK3在GBM组织和细胞中的表达情况,通过siRNA基因沉默技术研究它对GBM细胞迁移和粘附的影响。然后评价研PTEN功能缺失对PI3Kβ和JNK协同调控GBM细胞增殖的影,并且评估联合靶向MLK3和pl10β对GBM细胞迁移和黏着斑周转是否存在协同抑制作用且协同作用是否强于JNK和PI3Kβ。结果:MLK3在64.5%的GBM样本中(31例中有20例阳性结果)蛋白表达水平提高;其中,MLK3蛋白在8例复发的GBM样本中有7例显著高表达,且与GBM复发相关。通过MLK3表达降低后,GBM细胞迁移和侵袭能力降低。靶向PI3Kβ和JNK对过表达野生型PTEN的GBM细胞增殖有较强的协同抑制作用,而对PTEN功能缺失的GBM细胞的抑制作用较弱。同时联合靶向MLK3抑制剂URMC-099和PI3Kβ AZD6482抑制剂比靶向JNK抑制剂和PI3Kβ抑制剂对GBM细胞的增殖有更强的协同作用。结论:MLK3蛋白表达与胶质母细胞瘤复发相关,且在胶质母细胞瘤迁移及侵袭中发挥重要作用。联合靶向PI3Kβ和MLK3对GBM细胞增殖的协同作用,发现该协同作用比联合靶向PI3Kβ和JNK更强,为后续研究联合靶向PI3Kβ和MLK3抑制GBM细胞迁移侵袭及其分子机制提供了可靠的依据。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R739.4
【图文】：

与 PI3Kβ对胶质母细胞瘤细胞增殖的协同调控作用，且 JNK2 在这两个亚基中的作用更为重要。图3.1 诱导表达野生型PTEN 对联合靶向PI3Kβ 和JNK 协同抑制胶质母细胞瘤细胞 U87.PTEN.WT 增殖的影响。(A) Muristerone A 处理 U87.PTEN.WT 细胞不同时间后 PTEN 和磷酸化 Akt 的表达情况。(B) PTEN 对联合靶向 p110β 和 JNK 协同抑制胶质母细胞瘤细细胞 U87.PTEN.WT 增殖的影响。无水乙醇作为 Muristerone A处理的阴性对照，DMSO作为TGX-221和SP600125处理的阴性对照。(n=3。*: p <0.05;**: p <0.01。)

24图3.3 MLK3在胶质母细胞瘤组织和细胞系中的表达，及应用siRNA干扰MLK3的表达。（A）代表性图片表示MLK3在胶质母细胞瘤组织样本中的表达情况；（B）MLK3蛋白在9种胶质母细胞瘤细胞系中的表达情况；（C）灰度分析MLK3在原发与复发GBM组织中的蛋白表达水平(*: p<0.05)；（D）灰度分析 MLK3 在胶质母细胞瘤细胞系中的蛋白表达水平。

26图3.4 siRNA干扰MLK3的表达后胶质母细胞瘤细胞迁移、粘附和侵袭能力的变化。（A）应用siRNA干扰胶质母细胞瘤细胞系U-87 MG中MLK3的表达。（B-C）划痕实验表明siMLK3显著降低了U-87 MG和U-118 MG细胞的迁移能力。（D）U-87 MG和U-118 MG细胞的粘附能力经siMLK3_6处理后显著升高了。（E-F）siMLK3显著降低了U-87 MG和U-118MG细胞的侵袭能力。（n=3; *: p <0.05; **: p <0.01）3.4 联合靶向 PI3Kβ 和 MLK3 对胶质母细胞瘤细胞增殖的协同抑制作用。为了研究联合靶向MLK3 和PI3Kβ对胶质母细胞瘤细胞增殖的协同抑制作用，我们利用MLK3 抑制剂URMC-099 和PI3Kβ的抑制剂AZD6482 单独或联合处理胶质

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本文编号：2770508