小鼠脑缺血再灌注损伤相关的脂质分子对神经元的作用及机理

发布时间：2020-07-26 19:47

【摘要】：研究目的目前脑卒中已成为高致死率和致残率的疾病之一,因此对于人类的生活及生活质量造成严重影响,但目前最有效的治疗方式还是前期的溶栓。本实验使用动物中风模型MCAO模型,利用高灵敏度的UPLC-MS质谱平台,研究小鼠脑缺血/再灌注期间损伤的大脑皮层内脂质的变化,因此本实验通过脂组学方法来寻找在小鼠缺血再灌注脑损伤功能恢复过程中显著性变化的脂质分子并研究其对神经元作用活性的影响及作用的分子机制等。研究方法1.建立小鼠MCAO中风模型,然后用超高效液相色谱对小鼠大脑皮层进行脂组学分析,筛选出具有显著性差异的脂质分子。2.取胚胎期胎鼠的大脑皮层,用做原代神经元的培养,并用免疫荧光染色(MAP-2)来鉴定是否为神经元。3.将培养的原代神经元,接种在96孔板上。用筛选到的脂质分子处理原代神经元后,再用CCK 8试剂盒,检测脂质分子对神经元活力的影响。4.分别购买了几种抑制细胞死亡的抑制剂和脂质分子共同孵育原代神经元,同样用CCK 8测细胞活力,探究细胞死亡的方式。5.将培养的原代神经元,接种在培养皿中,然后加入不同浓度的脂质分子,检测细胞内钙离子信号变化,探究脂质分子是否能引起神经元兴奋性。研究结果1.建立小鼠MCAO中风模型后,然后用超高效液相色谱对小鼠大脑皮层进行相对性定量和绝对性定量分析,共筛选到578种脂质分子,然后分析各组间差异脂质,共筛选到84种显著性差异的脂质分子。2.在中风中一些显著性变化的脂质分子可以显著性降低原代神经元的活力(脂质分子浓度为25μM-50μM时),导致神经元死亡。3.对脂质分子诱导神经元死亡方式的探究,发现有些细胞死亡抑制剂可以显著性恢复神经元的活力,MK-801也能阻断一些脂质分子引起的兴奋性毒性。研究结论小鼠脑缺血再灌注过程中,一些显著性变化的脂质分子在中风恢复过程中起重要的调节作用。其中一些脂质分子例如磷脂酰胆碱(Phosphatidylcholine)、溶血卵磷脂(Lysophosphatidylcholine)、神经酰胺(Ceramides)、磷脂酰乙醇胺(P hosp-hatidylethanolamine)、溶血磷脂酰乙醇胺(Lysophosphatidylethanolamin e)等在中风恢复过程中可诱导小胶质细胞激活,引起炎症反应和神经元的兴奋性毒性,导致神经元死亡。
【学位授予单位】：哈尔滨工业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R743.3
【图文】：

哈尔滨工业大学工程硕士学位论文心缝合伤口。小鼠在中动脉缺血再灌注手术期间，要 直用加热灯与持小鼠基础体温在 37℃左右。同样，选取条件相同的 c57 雄鼠，在同进行假手术组小鼠模型的建立，假手术组的小鼠并没有对其进行大脑，仅仅在小鼠颈部进行小范围的开口和正常的缝合。

- 24 -图 2-2 小鼠缺血再灌注及恢复期间体温和体重的变化2.4.2 测定小鼠 MCAO 后行为学1) 测定小鼠 MCAO 后神经功能缺损评分：如下图 2-3 中，本次试验共有 n=26 只小鼠进行了 MCAO 手术，另外 n=10 只小鼠进行了 Sham 手术，然后小鼠在手术清醒后对其进行手术评分：结果发现，MCAO手术组小鼠评分大都在 2 分左右，为中度神经功能损伤，由于 MCAO 手术组小鼠的手术评分比较均匀，因而神经功能的损伤没有显著性差异，可用于此实验后续的研究；而 Sham 组小鼠并没有神经功能损伤的症状，也可用于后续的对照组的实验。

哈尔滨工业大学工程硕士学位论文图 2-3 小鼠 MCAO 后神经功能缺损评分行为学测试：4 中图所示：小鼠 MCAO 手术后，其后肢的抓力后 1 天，达到最小值，然后运动功能逐渐恢，但依旧没有恢复到 Sham 组鼠的正常水平。ShamMCAO01234neurologicaldeficits

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本文编号：2771207