银杏内酯对实验性自身免疫性神经炎的治疗作用及机制

发布时间：2020-08-25 05:47

【摘要】：目的:吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barrés syndrome,GBS)是一种自身免疫性疾病,是目前世界上引起急性肢体迟缓性瘫痪的最主要原因之一,目前治疗方法主要为血浆置换(plasma exchange,PE)及静注免疫球蛋白(intravenousimmunoglobulin,IVIg),尽管接受上述治疗,仍有患者预后不良或留有严重后遗症,因此GBS新的治疗方法的探索仍是目前神经病学亟待解决的问题。本研究拟通过观察银杏内酯在EAN中的作用及其可能机制,为未来GBS治疗新方法的探索奠定一定的理论基础。我们通过建立其动物模型,即实验性自身免疫性神经炎(experimental autoimmune neuritis,EAN),根据EAN的临床评分、坐骨神经病理及免疫学指标来评价银杏内酯在GBS的潜在治疗作用。研究方法:(1)实验动物及分组:选择6-8周雄性C57BL/6小鼠,体重约18-20g,购于北京维通利华实验动物技术有限公司,动物随机分为对照组:EAN+PBS组(n=7),EAN+银杏内酯低剂量(5mg/kg/d)组(n=7),EAN+银杏内酯高剂量(10mg/kg/d)组(n=7)。(2)EAN模型的建立及临床评分:百日咳毒素(pertussis toxin,PTX),溶解于PTbuffer后尾静脉注射,将P0180-189的肽段、不完全弗氏佐剂及结核分枝杆菌菌素充分乳化,于背部皮下注射。(3)实验动物的干预:在EAN造模第六天,按照分组,腹腔注射PBS或者银杏内酯注射液,高峰期同时处死三组小鼠。(4)实验取材及观察指标:(1)在第一次皮下注射P0后开始观察小鼠皮毛、尾部张力、步态情况及小鼠体重变化情况,根据评分标准每天对小鼠进行临床评分。(2)取小鼠脊坐骨神经近脊髓段,通过HE和LFB病理染色,观察EAN小鼠坐骨神经炎症及髓鞘脱失的情况;(3)分离EAN小鼠脾脏,通过流式细胞术检测脾脏单个核细胞悬液(the mononuclear cells,MNCs)中Th1、Th2、Th17、Treg细胞在CD4~+T细胞的比例。结果:(1)临床评分:在发病过程中,银杏内酯治疗组小鼠临床评分均低于对照组。在建立模型第9天,低剂量银杏内酯治疗组临床评分较对照组低(p0.05),第14-15天,低剂量和高剂量银杏内酯治疗组临床评分均比对照组低(p0.05)。(2)EAN小鼠坐骨神经病理结果:对照组小鼠坐骨神经炎性细胞浸润及髓鞘缺失最严重,银杏内酯高剂量组次之,银杏内酯低剂量组最轻。(3)CD4+T细胞的测定:(1)银杏内酯低剂量组可下调MNCs中Th17细胞的比例,较对照组明显降低(P0.05),也可下调脾脏MNCs中Th1细胞的比例(P0.05)。(2)高剂量银杏内酯也可下调MNCs中Th17及Th1细胞的比例,较对照组减低(P0.05)(3)银杏内酯低剂量组和银杏内酯高剂量组MNCs中Treg细胞的比例较对照组升高(P0.05)。(4)银杏内酯低剂量组MNCs中Th2细胞比例较对照组减低(P0.05),银杏内酯高剂量组MNCs中Th2细胞比例较对照组升高(P0.05)。结论:(1)低剂量银杏内酯可以有效治疗小鼠EAN,降低临床评分,延缓高峰期,减轻周围神经炎性浸润和髓鞘脱失等周围神经组织损害。(2)低剂量银杏内酯可减轻小鼠EAN病情,可能主要通过抑制Th17细胞来发挥作用。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R745.43
【图文】：

第 4 章 实验结果4.1 临床评分将 21 只小鼠随机分为 3 组，每组 7 只，即对照组；EAN+银杏内酯 5mgEAN+银杏内酯 10mg/kg/d 组，从造模第 6 天开始按照上述实验方案进行干用 PBS 处理的小鼠的神经系统症状的高峰时间平均在第 12 天，银杏内酯治小鼠神经症状的高峰时间平均在第 13 天(如图 4.1 所示)。 在建立模型第 9低剂量银杏内酯治疗组临床评分较对照组低（p <0.05），第 14-15 天，低剂高剂量银杏内酯治疗组临床评分均比对照组低（p <0.05）。

图 4.2 各组小鼠坐骨神经 HE 和 LFB 染色A、B、C 分别为 EAN 组、银杏内酯低剂量组、银杏内酯高剂量组小鼠坐骨神经 HE染色， D、E、F 分别为 EAN 组、银杏内酯低剂量组、银杏内酯高剂量组小鼠坐骨神经 LFB染色。A、B、C、 D、E、F 光学显微镜下观察（100×）。4.3 高峰期小鼠脾脏单个核细胞悬液 Th1、Th2、Th17 及 Treg细胞水平通过流式细胞术来检测各组小鼠脾脏 MNCs 中 Th1，Th2，Th17 和 Treg 细胞在 CD4 + T 中的比例。我们可以看出(如表 4.1 ，图 4.3),银杏内酯可以下调脾脏 MNCs 中 Th17 细胞的比例。与对照组相比，低剂量治疗组脾脏 MNCs 中 Th17细胞比例显著降低，（p <0.05），而高剂量治疗组也有减少，但无统计学意义

图 4.3 小鼠 Th17 细胞在 CD4+T 细胞的比例流式图A 为对照组，B 为银杏内酯低剂量组，可见对照组 Th17 细胞比例明显高于银杏内酯低剂量组。表 4.1 各组小鼠 MNCs 中 Th1,Th2,Th17 和 Treg 细胞的比例（%）组别 Th1 Th17 Th2 Treg对照组 13.92±3.55 0.62(0.57,0.88) 0.91±0.50 0.28±0.14低剂量治疗组 8.95±3.63▲0.33±0.15*0.57±0.34▲0.28±0.12▲高剂量治疗组 12.06±4.60▲0.52±0.36▲1.02±0.79▲0.40±0.23▲注：*P<0．05 VS 对照组，▲P>0.05 VS 对照组

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本文编号：2803339