低温下脂肪细胞免疫相关基因的差异表达及其对贝尔麻痹病因的启示

发布时间：2020-08-29 09:41

　　 目的:利用RNA测序分析技术,鉴定低温下脂肪细胞免疫相关基因的表达谱,探讨其与贝尔麻痹发病机制的关联性。方法:从雄性Sprague-Dawley大鼠的白色脂肪组织中分离前脂肪细胞,使用分化诱导液(Dulbecco改良的低糖Eagle培养基含10%胎牛血清,1%青霉素/链霉素/两性霉素B无菌溶液,1μmol/L地塞米松,200μmol/L吲哚美辛,0.5mmol/L IBMX和10μmol/L胰岛素)成脂诱导后在30℃,20℃和10℃的不同急性冷暴露条件下培养,提取RNA进行测序分析。使用包括R语言包(DEGseq)和KOBAS3.0软件进行差异表达基因分析,差异基因的基因本体论术语和京都基因和基因组百科全书通路富集分析。并利用逆转录聚合酶链反应验证差异表达基因。结果:在30℃,20℃和10℃下,分别鉴定出55个(35个上调和20个下调),121个(76个上调和45个下调)和92个(64个上调和28个下调)差异表达的基因。基因本体论术语和京都基因和基因组百科全书通路富集分析显示差异表达基因在免疫相关途径中显著富集,包括白细胞跨内皮迁移,补体和凝血级联,趋化因子信号通路,NOD样受体信号通路和血小板活化,以及感染相关通路如单纯疱疹病毒感染,细菌侵入上皮细胞和沙门氏菌感染。关键的免疫相关差异表达的基因包括炎性细胞因子或趋化因子(CSF1,CXCL1,CCL2和CCL7),转录因子或信号分子(Vcl,Fos,Actg1)。这表明急性冷暴露对脂肪细胞有强烈的促炎作用,导致了大量的细胞因子产生。结论:急性冷刺激可使脂肪细胞产生强烈的炎性反应。冷刺激下脂肪细胞相关免疫基因的差异表达以及相关免疫信号通路的富集,有可能对包缠轴突的雪旺细胞产生影响并参与髓鞘变性,从而导致脱髓鞘的发生。
【学位单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R745.12
【部分图文】：

图 1.脂肪细胞分化和油红 O 染色的代表性实例。（a）分化前脂肪细胞的形态学。（b）分化后脂肪细胞的形态学。（c）油红 O 染色检测的脂滴积累（红色）。 比例尺：A：100μm; B 和 C：50μm。

图 2.差异表达基因（DEGs）的主成分分析和火山图。（a）在 37℃（对照组），30℃，20℃和 10℃（实验组）下培养 8 小时的脂肪细胞主成分分析。PC1 显示冷暴露组之间的差异; PC2 表明对照和冷暴露的脂肪细胞之间的差异。（b-d）相对于对照组（37℃）在较低温度下培养的脂肪细胞中 DEGs 的火山图。 将 log10 的负 q值（y 轴）相对于 log2 倍数变化（log2FC）（x 轴）作图。 DEGsq 鉴定 DEG。 显著性阈值是| log2FC | > 1，调整后的 p 值<0.05。 红色，上调的 DEGs; 绿色，下调的 DEGs。

35 3.低温条件下培养的脂肪细胞基因本体（GO）术语的分布。a）30℃，（b）20℃，（c）10℃。 显示前 30 个 GO 术语。 GO 富集分析将这些差异表基因分组为功能组。

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本文编号：2808384