ADAMDEC1对人脑胶质瘤U87细胞生物学行为的影响

发布时间：2020-08-31 21:31

　　 目的:研究ADAMDEC1(解聚素金属蛋白酶家族癸蛋白1)对人脑胶质瘤U87细胞的增殖、黏附、侵袭、迁移和凋亡等细胞生物学行为的影响。方法:1.从上海吉凯基因公司提供的三种可能有效的慢病毒(分别携带TACCACGAAACCTGAGAACAT、CTGATAAGA AGCTTTGTGTTT、TCCCAGGAATCTTGTGAATTT三个基因片段)中筛选能够下调U87细胞ADAMDEC1表达的慢病毒:(1)分别用三种慢病毒感染U87细胞,筛选最适复感染指数值(MOI),通过观察GFP荧光的表达情况来判定转染效率;(2)采用Real-time PC R法分别检测三种慢病毒感染后U87细胞ADAMDEC1 mRNA的表达情况,并对三种慢病毒感染后U87细胞ADAMDEC1mRNA的表达差异进行分析比较,筛选出能够下调U87细胞ADAMDEC1表达的慢病毒;2.实验组(ADAMDEC1-RNAi)人脑胶质瘤U87细胞通过用筛选出的能够下调U87细胞ADAMDEC1表达的慢病毒在最适复感染指数的条件下进行感染来下调ADAMDEC1的表达,对照组(CONTROL-RNAi)用阴性对照慢病毒(携带TTCTCCGAACGTG TCACGT基因片段)在最适复感染指数的条件下进行感染,采用We stern blot法检测稳定转染的U87细胞ADAMDEC1蛋白的定性、定量表达情况,并对转染后U87细胞ADAMDEC1蛋白的表达差异进行分析比较;3.采用CCK-8法检测两组细胞增殖及黏附能力的差异,并对差异进行分析比较;4.采用Transwell法检测两组细胞侵袭及迁移能力的差异,并对差异进行分析比较;5.采用流式细胞技术检测两组细胞凋亡情况的差异,并对差异进行分析比较。实验数据采用SPSS 19.0统计软件进行分析,计量数据以x±s表示,两组间差异采用t检验分析,P0.05为差异有统计学意义。结果:1.通过观察GFP荧光的表达情况可得知:上海吉凯基因公司提供的携带特异性基因片段的慢病毒能够感染人脑胶质瘤U87细胞,且最适复感染指数为20;2.Real-time PCR结果显示:携带TCCCAGGAATCTTG TGAATTT基因片段的慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞后,与对照组相比,稳定转染后的U87细胞的ADAMDEC1-RNAi mRNA表达水平均明显降低(P0.01),即TCCCAGGAATCTTGTGAATTT基因片段为下调ADAMDEC1基因表达的有效片段;3.CCK-8检测结果显示:携带有效基因片段的慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞后,与对照组相比,下调ADAMDEC1表达后的U87细胞的增殖能力下降(P0.05),黏附能力明显受到抑制(P0.01);4.Transwell检测结果显示:携带有效基因片段的慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞后,与对照组相比,下调ADAMDEC1表达后的U87细胞的侵袭和迁移能力均明显下降(P0.01);5.流式细胞术检测结果显示:携带有效基因片段的慢病毒感染人脑胶质瘤U87细胞后,与对照组相比,下调A DAMDEC1表达能够促进U87细胞的凋亡(P0.01)。结论:在体外细胞培养试验中,下调ADAMDEC1表达能够显著抑制U87细胞的增殖、黏附、侵袭、迁移能力,促进U87细胞的凋亡。
【学位单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.4
【部分图文】：

图 1 U87 细胞的转染效率（A：明视野 100×；B：绿色荧光视野 100×）Fig.1 Transfection efficiency of U87 cells（A：bright field 100×；B：green fluorescent field 100×）AB

默情况t 法进行蛋白表达量的检测，实验中暗带着色的深浅来判断目的蛋同的情况下，暗带的着色越深， Quantity-one 软件对 Western bl析，以此来对蛋白的表达量进行R 检测转染后 U87 细胞 ADAMDEC mRNA expression in U87 cells after trReal-time PCR CONTROL-RNAi 组比较，* P ＜0

AMDEC1 基因沉默表达对 U87 细胞增殖能力的影响植相同计数的细胞，并分别用 ADAMDEC1-RNAi 及ROL-RNAi 进行转染，在实验条件下培养，在特定时间测定特定波长处 96 孔板各孔吸光度（OD 值），OD 值正比，即细胞计数越多，测得的 OD 值越大。CCK-8示：用ADAMDEC1-RNAi转染U87细胞后，U87细胞 3 Western blot 检测转染后 U87 细胞 ADAMDEC1 蛋白的表达.3 ADAMDEC1 protein expression in U87 cells after transfection deWestern blot与 CONTROL-RNAi 组比较，* P ＜0.01。

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本文编号：2809343