载脂蛋白E缺乏对视神经脊髓炎体外模型各时期胆固醇代谢的影响

发布时间：2020-09-01 17:50

　　目的:使用NMO-IgG和补体诱导体外乳鼠脊髓切片制作视神经脊髓炎(NMO)体外模型并探索载脂蛋白E(ApoE)缺乏对NMO体外模型胆固醇代谢和损伤的影响。方法:将7日龄的正常基因型(WT)及ApoE基因敲除(ApoE-/-)的C57BL/6J小鼠脊髓切片在transell中培养7天后,将脊髓片随机分为造模组及对照组。造模组加入从视神经脊髓炎患者体内提取出的NMO-IgG及正常人补体血清(HC);对照组除不加入NMO-IgG外余同实验组,分别继续培养12、24、36小时。用改良的厚组织片免疫荧光法检测脊髓组织切片水通道蛋白4(AQP4)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,计算脊髓片AQP4和GFAP缺失面积比例;用蛋白质印记(WB)检测脊髓片ApoE的蛋白量;用荧光定量逆转录-聚合酶连反应(RT-PCR)检测ApoE mRNA的表达;用ELISA检测各时期培养液的ApoE浓度;用高效液相色谱法(HPLC)测定培养液总胆固醇浓度。结果:免疫荧光结果显示,ApoE-/-NMO-IgG+HC组和WT-NMO-IgG+HC组各时期(12小时、24小时、36小时)AQP4及GFAP染色缺失比例均高于0小时(P0.05);RT-PCR结果显示,WT-NMO-IgG+HC组脊髓组织片中ApoE mRNA的表达水平较WT组(对照组)明显下调(P0.05);WB结果显示,WT-NMO-IgG+HC组脊髓组织片中ApoE蛋白水平较WT组明显下调(P0.05);ELISA结果显示,WT组和WT-NMO-IgG+HC组不同时培养液中ApoE的浓度均存在差异(P0.05),其中在12小时时期WT组ApoE的浓度低于WT-NMO-IgG+HC组(P0.05),而在24小时、36小时时期WT组ApoE的浓度显著低于WT-NMO-IgG+HC组(P0.05);HPLC结果显示,WT组、ApoE-/-组、WT-NMO-IgG+HC组和ApoE-/-NMO-IgG+HC组在造模高峰期(24小时)时,培养液中总胆固醇的浓度均存在差异(P0.05),培养液中总胆固醇变化趋势图示1、WT组和ApoE-/-组相比,ApoE缺失组在各个时期代谢到培养液中的胆固醇均更高(P0.05);2、WT组和WT-NMO-IgG+HC组相比,WT-NMO-IgG+HC组在12小时胆固醇改变量为负值,24小时和36小时该变量为正值,而WT组在各个时期胆固醇该变量均为正值。3、ApoE-/-组和ApoE-/-NMO-IgG+HC组相比,各个时期ApoE-/-NMO-IgG+HC组均较ApoE-/-组总胆固醇浓度改变量高(P0.05)。结论:1、使用从NMO患者血清提取出的NMO-IgG和HC,可以诱导NMO体外模型,并在ApoE缺失的情况下在造模组的各时期损伤均会加重。2、在NMO体外脊髓切片模型中,ApoE蛋白表达量和mRNA表达量均减少。3、ApoE缺失会使NMO体外脊髓切片模型胆固醇代谢紊乱,进而加重NMO的严重程度。
【学位单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R744.52
【部分图文】：

荧光染色,脊髓,免疫组织化学,不同时期

图1-1.各组不同时期GFAP、AQP4免疫组织化学荧光染色Figure 1-1. Immunohistochemical staining of GFAP and AQP4 in different groups at different stages： A、WT NMO-IgG+HC组各个时期脊髓GFAP荧光染色（4×）；B:WT-NMO-IgG+HC组各个时脊髓AQP4荧光染色（4×）；C、ApoE-/-NMO-IgG+HC组各个时期脊髓GFAP荧光染色（4×）；、ApoE-/-NMO-IgG+HC组各个时期脊髓AQP4荧光染色（4×）。

表达水平

图 2-1.WT 组与 WT-NMO-IgG+HC 组脊髓片中 ApoE mRNA 表达水平（每组 n=8；*P＜0.05）Figure2-1.ApoE mRNA expression in spinal cord tissue of WT group and WT-NMO-IgG+HC group (n=8per group; *P<0.05)3.2 WT组（Control组）与WT-NMO-IgG+HC组脊髓组织片中ApoE蛋白水平

载脂蛋白E缺乏对视神经脊髓炎体外模型各时期胆固醇代谢的影响

WT组与WT-NMO-IgG+HC组脊髓片

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