BST-2蛋白参与HCMV感染诱导的肿瘤细胞增殖与迁移

发布时间：2020-09-07 15:39

　　目的:1.探究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染人胶质瘤细胞(U251/U87)后肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力。2.不同滴度HCMV感染人胶质瘤细胞(U251/U87)后即刻早期蛋白IE1表达变化及骨髓基质细胞抗原2(Bone Marrow Stromal cell antigen 2,BST-2)的表达情况。3.通过对BST-2进行干扰抑制后降低BST-2蛋白表达水平来检测HCMV感染人胶质瘤细胞AKT蛋白磷酸化水平及胶质瘤细胞(U251/U87)的增殖和迁移能力,以此探讨BST-2在HCMV感染胶质瘤细胞的过程中发挥的作用。进一步研究BST-2的表达水平对胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力的作用。方法:1.不同滴度HCMV(MOI=1/MOI=0.1)感染人胶质瘤细胞(U251/U87)建立病毒感染细胞模型。2.通过细胞划痕愈合实验和Transwell实验检测不同滴度HCMV(MOI=1/MOI=0.1)感染对人胶质瘤细胞(U251/U87)迁移能力的影响。3.通过Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)检测HCMV感染人胶质瘤细胞(U251/U87)后细胞增殖情况。4.使用小干扰RNA(sh RNA)抑制BST-2蛋白的表达水平,通过Western blot方法筛选出有效沉默靶点。5.通过Western blot方法检测HCMV感染对IE1蛋白、BST-2、P-AKT等蛋白表达的影响。6.免疫荧光技术标记BST-2检测BST-2干扰后荧光蛋白表达水平。7.流式细胞术检测BST-2干扰后对细胞凋亡的影响。8.免疫组织化学技术染色检测不同分级胶质瘤切片的IE和BST-2蛋白表达水平。结果:1.HCMV感染人胶质瘤细胞(U251/U87)后细胞增殖和迁移能力增强,且高滴度HCMV(MOI=1)比低滴度HCMV(MOI=0.1)的促进作用更加明显。2.HCMV感染人胶质瘤细胞(U251/U87)后,病毒表达即刻早期蛋白IE1与BST-2表达明显,且与病毒感染滴度、感染时间呈正相关。3.HCMV(MOI=1)感染U87细胞后si BST-2-171与si BST-2-256两种靶序列对BST-2的沉默具有显著效果。4.将人胶质瘤细胞(U251/U87)感染或模拟感染HCMV(MOI=1)48 h,分别转染sh BST-2-171、sh BST-2-256对BST-2进行干扰抑制后,标记荧光蛋白BST-2及Western blot蛋白表达量检测。BST-2蛋白表达量显著下降,并明显抑制了Akt蛋白的磷酸化,流式细胞术检测干扰BST-2对细胞凋亡并无明显影响。5.将人胶质瘤细胞(U251/U87)感染或模拟感染HCMV(MOI=1)48 h,分别转染sh BST-2-171、sh BST-2-256对BST-2进行干扰抑制,人胶质瘤细胞(U251/U87)增殖和迁移能力明显减弱。结论:1.HCMV感染人胶质瘤细胞(U251/U87)可使其增殖迁移能力增强,且与病毒感染滴度、感染时间呈正相关。2.BST-2参与了HCMV感染导致的恶性胶质瘤细胞(U251/U87)增殖和迁移,抑制BST-2可使其增殖和迁移能力减弱。3.BST-2抑制后可明显降低胶质瘤细胞(U251/U87)增殖迁移,可作为今后胶质瘤治疗的靶点。
【学位单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.4
【部分图文】：

状态图,病毒,正常生长,细胞形态

图 1 病毒扩增细胞形态及病毒滴度检测ELF 细胞正常生长状态（100×）ELF 细胞感染病毒后 3d，可见明显病变巢，病变细胞变圆（100×）毒滴度检测报告，TCID50/ml: 1.31×106

柱状图,细胞迁移,细胞,柱状图

图 2 HCMV 感染促进胶质瘤细胞（U251/U87）迁移MV（MOI=1,MOI=0.1）感染 U251/U87 细胞 24h 后的细胞迁移能力明51/U87 细胞迁移率柱状图 **：相对于对照组，p <0.012.1 HCMV 251/U87）增殖

BST-2蛋白参与HCMV感染诱导的肿瘤细胞增殖与迁移

HCMV感染促进胶质瘤细胞（U251/U87）增殖AHCMV（MOI=1,MOI=0.1）感染U251细胞增强细胞增殖能力

【参考文献】