LRCH1基因多态性与急性一氧化碳中毒后迟发脑病的关联研究

发布时间：2020-09-09 18:28

　　背景急性一氧化碳中毒后迟发性脑病(delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning,DEACMP)是指经抢救完全恢复的急性一氧化碳中毒(acute carbon monoxide poisoning,ACMP)患者,通过约2-60天“假愈期”(完全正常或基本正常),再次出现急性痴呆、精神异常等为主要症状的一种疾病,是一种严重的器质性精神病,在ACMP患者中发病率约10%~30%,具有恢复慢、并发症多、预后差等特点,且缺乏明确有效的预测和治疗手段,严重影响的患者及其家庭的生活质量。既往众多关于DEACMP患者脑脊液和外周血分子生物学水平变化的研究提示本病具有遗传易感性。根据全基因组关联分析(Genome-wide association study,GWAS),本课题筛组选出DEACMP相关的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)基因位点,对潜在关联的候选基因SNP位点进一步验证,揭示DEACMP发病可能的机制,为预防、诊断和治疗提供新的思路和分子靶点。目的通过富含亮氨酸重复序列及钙调蛋白同源结构域的蛋白1(Leucine-rich repeat and calponin homology domain-containing protein 1,LRCH1)基因单核苷酸多态性位点(rs1539177,rs17068697,rs9534475,rs2236592)和急性一氧化碳中毒后迟发性脑病的关联研究,发现新的参与DEACMP发病的遗传易感基因。方法1.DEACMP患者在住院次日清晨6-8点空腹采血,ACMP患者在清醒后1日内空腹采血。用EDTA抗凝真空采血管自肘静脉采集研究对象外周血标本3ml,并保存于-70℃冰箱中。2.提取及鉴定样本DNA。3.运用Sequenom分型检测技术进一步分析验证LRCH1基因多态性与DEACMP遗传易感性。结果1.LRCH1基因rs1539177位点:等位基因关联分析结果显示DEACMP组与ACMP组患者rs1539177位点等位基因频率分布比较差异无统计学意义(Pobs=0.050346)。三种遗传模式(共显性遗传、显性遗传、隐性遗传)下rs1539177基因型与DEACMP发病的相关性分析结果显示,对于共显性模型,Pobs=0.043729,OR=1.279(1.007-1.624);对于显性遗传模型,Pobs=0.018579,OR=1.511(1.070-2.133);对于隐性遗传模型,Pobs=0.50527,OR=1.165(0.743-1.828)。2.LRCH1基因rs17068697位点:等位基因关联分析结果显示DEACMP组与ACMP组患者rs17068697位点等位基因频率分布比较差异无统计学意义(Pobs=0.056602)。三种遗传模式(共显性遗传、显性遗传、隐性遗传)下rs17068697基因型与DEACMP发病的相关性分析结果显示:对于共显性模型,Pobs=0.043125,OR=1.285(1.008-1.6381);对于显性遗传模型,Pobs=0.009228,OR=1.770(1.147-2.729);对于隐性遗传模型,Pobs=0.466963,OR=1.146(0.794-1.653)。3.LRCH1基因rs9534475位点:等位基因关联分析结果显示DEACMP组与ACMP组患者rs9534475位点等位基因频率分布比较存在显著性差别[Pobs=0.038445,OR=1.273(1.013-1.601)]。三种遗传模式(共显性遗传、显性遗传、隐性遗传)下rs9534475基因型与DEACMP发病的相关性分析结果显示:对于共显性模型,Pobs=0.035878,OR=1.285(1.017-1.623);对于显性遗传模型,Pobs=0.005935,OR=1.617(1.147-2.280);对于隐性遗传模型,Pobs=0.742672,OR=1.077(0.693-1.674)。4.LRCH1基因rs2236592位点:等位基因关联分析结果显示DEACMP组与ACMP组患者rs2236592位点等位基因频率分布比较无显著性差异(Pobs=0.080373)。三种遗传模式(共显性遗传、显性遗传、隐性遗传)下rs2236592基因型与DEACMP发病的相关性分析结果依次为:对于共显性模型,Pobs=0.064827,OR=1.254(0.986-1.597);对于显性遗传模型,Pobs=0.015784,OR=1.616(1.092-2.390);对于隐性遗传模型,Pobs=0.61508,OR=1.105(0.748-1.634)。结论1.按照常染色体共显性遗传、显性遗传模式,rs1539177位点、rs17068697位点、rs9534475位点与DEACMP易感性相关;2.按照常染色体显性遗传模式,rs2236592位点与DEACMP易感性相关;3.rs9534475位点等位基因A可能是DEACMP发病的风险因素;4.DEACMP的发病可能与LRCH1基因多态性相关。
【学位单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R595.1;R747.9
【部分图文】：

示意图,检测技术,分型,数据库

15图 1 Sequenom MassARRAY SNP 分型检测技术流程图与合成CBI 的 dbSNP 数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects/ LRCH1（rs1539177, rs17068697, rs9534475, rs2236592）所计。引物序列详见表 1。

DNA琼脂糖凝胶电泳,样本

图 2 样本 DNA 琼脂糖凝胶电泳图1 泳道条带为 DNA 分子量标准，2～11 泳道条带均亮度较高且整齐，提示为较完整的样本 DNA2.2 LRCH1（rs1539177、rs17068697、rs9534475、rs2236592）在基因的区间及物理位置表 2 LRCH1 四个 SNP 在基因的区间及物理位置Variant Chrom Position Annotation MAFrs1539177 G/A 13 46725920 intron 0.38 (A)rs17068697 A/G 13 46719680 intron 0.26 (G)rs9534475 A/C 13 46718476 intron 0.40 (C)rs2236592 T/C 13 46721781 intron 0.44 (C)1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11

同源序列,果蝇,同源序列,蛋白

其中，LRCH2（通常也命名为 DA204F4.4、KIAA1495）属于富含亮氨酸重复序列及钙黏蛋白同源结构域蛋白家族。这些蛋白在动物物种中高度保守，在果蝇中的一种相似蛋白的研究提示可能发挥细胞骨架蛋白作用。LRCH4 在晚期结直肠癌中高表达，发挥配体结合作用[45]。Nagase 等人[46]1999 年从人大脑中提取到 LRCH1 cDNA克隆体的完整序列。因 LRCH1 发现最早，因此研究相对更加深入。

【参考文献】