抑制GSK-3β活性通过自噬下调NLRP3炎性小体激活从而减轻脑缺血再灌注损伤

发布时间：2020-10-09 22:26

　　 背景:缺血性脑血管疾病是一种严重影响人类健康的常见病,具有致残率、死亡率高等特点。脑缺血再灌注损伤的发病机制涉及脑组织多种能量代谢过程,在此过程中发生的炎症级联反应可加重损伤,导致大量神经元死亡。近年研究表明,The NOD-like receptor family,pyrin domain-containing 3(NLRP3)炎性小体的活化是神经元损伤的关键环节。NLRP3炎性小体的活化可以促进脑缺血再灌注损伤的炎症级联反应从而加重损伤。因此,寻找能调控NLRP3炎性小体并阐明其调控机制具有极其重要意义。目的:探究能否通过抑制GSK-3β活性抑制NLRP3炎性小体的活化来减轻脑缺血再灌注损伤,以及抑制GSK-3β活性是否通过增强自噬活动对NLRP3炎性小体的活化产生抑制作用。方法:(1)使用Longa线栓法对SD大鼠行大脑中动脉栓塞模型建立,观察各实验组大鼠建模后神经功能评分,并利用TTC染色法检测大鼠的脑梗死体积。(2)运用特异性合成的GSK-3βsiRNA于MCAO模型建立前24h行侧脑室注射,运用GSK-3β抑制剂SB216763于MCAO模型建立前6h行侧脑室注射,运用自噬抑制剂3-MA于MCAO模型建立前30分钟行侧脑室注射。(3)利用Western blot检测GSK-3β,GSK-3β(p-Tyr216)、NRLP3炎性小体及其下游炎症因子cleaved-caspase-1、IL-1β、IL-18、自噬相关蛋白LC3B-I、LC3B-II与p62的表达。(4)ELISA法检测IL-β、IL-18蛋白浓度。(5)透射电镜显示各实验组神经细胞炎症情况及自噬体数量。结果:(1)抑制GSK-3β活性可减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。(2)抑制GSK-3β活性后,NLRP3炎性小体活性下降,其下游炎性因子cleaved-caspase-1、IL-1β、IL-18表达减少,脑梗死体积较前明显减小,行为学缺损较前有所改善。(3)抑制GSK-3β活性使大鼠脑缺血再灌注损伤中自噬活动增强。(4)在抑制GSK-3β活性的基础上下调自噬后,NLRP3炎性小体活性及下游炎性因子cleaved-caspase-1、IL-1β、IL-18表达水平升高。结果:(1)通过给大鼠侧脑室注射GSK-3β干扰片段或抑制剂抑制GSK-3β的活性可以减轻大鼠脑缺血再灌注损伤。(2)GSK-3β的活性被抑制后,NLRP3炎性小体活化及其下游炎性因子cleaved-caspase-1、IL-1β、IL-18的表达明显下降。(3)在大鼠脑缺血再灌注损伤中抑制GSK-3β的活性可增强自噬活动。(4)在大鼠脑缺血再灌注损伤中抑制GSK-3β的活性是通过自噬活动调控NLRP3炎性小体。结论:抑制GSK-3β的活性可通过增强自噬活动来降低NLRP3炎性小体活化从而减轻脑缺血再灌注损伤。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R743.3
【文章目录】：
符号说明
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 抑制GSK-3β的活性对大鼠脑缺血再灌注损伤的影响
    1 实验材料
    2 试验方法
    3 结果
    4 小结
第二部分 抑制GSK-3β活性对脑缺血再灌注损伤后NLRP3 炎性小体活化及下游炎症因子cleaved-caspase-1、IL-1β 、IL-18表达的影响
    1 实验材料
    2 试验方法
    3 结果
    4 小结
第三部分 抑制GSK-3β活性对于脑缺血再灌注损伤后自噬活动的影响
    1 实验材料
    2 试验方法
    3 结果
    4 小结
第四部分 抑制GSK-3β活性通过自噬影响NLRP3 炎性小体激活及下游炎症因子的释放
    1 实验材料
    2 试验方法
    3 结果
    4 小结
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    综述参考文献
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本文编号：2834289