ApoJ基因修饰的骨髓间充质干细胞移植对脑出血大鼠凋亡影响的研究

发布时间：2020-10-27 07:50

　　 目的:探讨携带载脂蛋白J(apolipoprotein J,ApoJ)基因修饰的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植对脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)大鼠凋亡可能的治疗作用及机制。方法:1.运用“贴壁筛选法”于体外分离、培养并纯化大鼠BMSCs。2.采用脂质体介导重组绿色荧光蛋白质粒pEGFP-N1-ApoJ转染体外培养的BMSCs,在荧光显微镜下观察重组质粒的转染效果,筛选出转染率最高的转染组。3.利用脑立体定位仪及“改良二次注血法”建立大鼠脑出血模型。将144只雄性SD大鼠,随机分为三组:ApoJ基因修饰的BMSCs移植组(ApoJ/BMSCs组)、BMSCs移植组(BMSCs组)及生理盐水对照组(NS组),每组48只。4.三组分别于造模成功24h后,移植等体积转染ApoJ基因的BMSCs悬液、BMSCs悬液和生理盐水至大鼠的脑出血部位,移植后再分为1 d、3 d、5 d、7 d 4个亚组,每个亚组12只。5.在各时间点采用“改良神经功能缺损评分(modified neurological severity score,mNss)”评估大鼠的神经功能情况;通过干湿重法测量脑组织含水量;HE染色法观察大鼠脑出血后血肿周围组织的病理改变;通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot和免疫组织化学染色检测血肿周围脑组织中线粒体促凋亡因子(Omi/HtrA2)的表达情况。结果:1.采用体外全骨髓贴壁筛选法,培养出活性较好且纯度较高的BMSCs,应用于下一步的实验研究。2.重组pEGFP-N1-ApoJ质粒成功转染大鼠BMSCs,且ApoJ基因能够稳定且大量表达。3.mNSS评分结果显示,在移植后的1d、3d、5d、7d,ApoJ/BMSCs组的评分明显低于同时间点的BMSCs组和NS组(P均0.05),其中BMSCs组又低于同时间点NS组(P均0.05)。4.大鼠脑组织含水量结果显示,ApoJ/BMSCs组脑组织含水量在1d、3d、5d、7d显著低于同时间点的BMSCs组和NS组(P均0.05),其中BMSCs组又低于NS组(P均0.05)。5.HE染色显示,ApoJ/BMSCs组和BMSCs组在1d、3d、5d、7d血肿周围神经细胞的水肿、坏死、炎性细胞及红细胞聚集较NS组均有减轻,且ApoJ/BMSCs组炎性细胞浸润少,神经元细胞水肿程度最轻,受损神经结构修复最好。6.RT-PCR结果显示,在各时间点ApoJ/BMSCs组Omi/HtrA2 mRNA表达水平较其他两组均显著降低(P均0.05),其中BMSCs组又低于同时间点NS组(P均0.05)。7.Western blot结果显示,与BMSCs组和NS组比较,ApoJ/BMSCs组移植后各时间点的Omi/HtrA2蛋白表达明显下调(P均0.05),其中BMSCs组又低于同时间点NS组(P均0.05)。8.免疫组化结果显示,ApoJ/BMSCs组在移植后各时间点的Omi/HtrA2蛋白表达水平显著低于另外两组(P均0.05),其中各时间点的BMSCs组又低于NS组(P均0.05)。结论:ApoJ基因修饰的BMSCs移植治疗脑出血较单纯的BMSCs移植疗效更显著,外源性ApoJ可能通过抑制Omi/HtrA2介导的细胞凋亡途径,减轻脑水肿,促进神经功能恢复,减轻脑出血后的继发性神经损伤。
【学位单位】：西南医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：R743.34
【文章目录】：
中文摘要
英文摘要
前言
材料与方法
结果
讨论
结论
参考文献
英汉缩略词对照表
致谢
载脂蛋白J在神经系统疾病中的研究进展（综述）
    参考文献

【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 宋歌;吕月涛;狄林林;宗文纳;陈伯旺;;早期肠内营养对重症肺炎大鼠免疫功能的影响分析[J];中国医学前沿杂志(电子版);2017年01期

2 叶敏;陈达柔;陈宇中;杜少冰;杜展鑫;李玉凤;唐珮瑜;杨昌山;朱晓琴;;右美托咪定后处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的保护作用[J];临床医学工程;2017年02期

3 王雅乐;李文泉;姚凤云;;黄连解毒汤对营养性肥胖大鼠的毒性研究[J];光明中医;2017年10期

4 关智宇;;三七总皂甙对骨折大鼠血管内皮生长因子基因扩增及蛋白表达水平影响的研究[J];临床医药文献电子杂志;2017年51期

5 王帅;贾琦珍;陈根元;程勇;张玲;马春晖;;小花棘豆中毒对大鼠下丘脑—垂体—卵巢轴α-甘露糖苷酶的影响[J];福建农林大学学报(自然科学版);2016年01期

6 周挺;夏菁;李增攀;徐丽艳;韩文文;方建江;;法舒地尔对百草枯致大鼠肺纤维化的干预作用[J];浙江实用医学;2016年01期

7 王亚东;李东朋;郭德伟;宋及时;李红伟;钱伟强;杨波;;富血小板血浆对创伤性颅脑损伤大鼠神经功能的保护作用[J];吉林大学学报(医学版);2016年05期

8 郑国祥;于强;;白虎汤对全身炎症反应综合征大鼠炎症因子的影响[J];四川中医;2015年01期

9 符晖;王桥生;方志雄;刘雁;周斌;彭忠田;梁咸章;;辛伐他汀预处理对大鼠神经源性肺水肿的作用及其机制[J];中国动脉硬化杂志;2015年10期

10 商明红;何龙其;;西维来司钠对大鼠脑出血保护作用机制的实验研究[J];现代养生;2017年10期

相关博士学位论文 前10条

1 张雪莹;LncRNA CD36-005在PCOS大鼠模型子宫中的表达及相关功能的研究[D];吉林大学;2019年

2 潘磊磊;Orexin-A对晕动症缓解作用机制的研究[D];中国人民解放军海军军医大学;2019年

3 成晨;NPPA基因突变通过激活炎症和心肌纤维化引起房颤[D];华中科技大学;2019年

4 石艳;空间学习通过上调海马miR-191改善慢性应激诱导的大鼠抑郁行为[D];华中科技大学;2018年

5 江弘炀;大鼠肾脏内草酸转运体Slc26a6的表达对实验性草酸钙结石形成的作用研究[D];华中科技大学;2019年

6 卞艺斐;马齿苋对实验性肠炎大鼠的保护作用及其机制研究[D];中国农业大学;2018年

7 白方会;正天丸和川芎嗪对偏头痛模型大鼠三叉神经血管系统神经递质表达的影响[D];南方医科大学;2016年

8 顿晶晶;补肾中药更康颗粒的药效学及急性毒理实验研究[D];广州中医药大学;2016年

9 穆道周;芍药苷抗抑郁促动力作用的实验研究[D];南京中医药大学;2016年

10 王跃旗;枫寥肠胃康对腹泻型肠易激综合征大鼠结肠动力及氯离子分泌的影响[D];北京中医药大学;2017年

相关硕士学位论文 前10条

1 金伟中;出生前尼古丁暴露对新生大鼠orexin A呼吸调节作用的影响[D];复旦大学;2009年

2 胡湘;有氧运动对CUMS大鼠学习记忆及海马SYP、PSD-95的影响[D];成都体育学院;2019年

3 叶琪;有氧运动对CUMS大鼠下丘脑AVP的影响[D];成都体育学院;2019年

4 关雪峰;MiR-204-5p通过靶基因Cav-1调节大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究[D];吉林大学;2019年

5 牛泽峰;锌预处理通过促进骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化并降低自噬修复大鼠脊髓缺血再灌注损伤的作用机制研究[D];吉林大学;2019年

6 董阳;Aicardi-Goutieres综合征相关基因SAMHD1敲除大鼠模型的构建及分析[D];安徽医科大学;2019年

7 刘京京;IL-28B在SD大鼠非酒精性脂肪性肝炎形成中的作用研究[D];延安大学;2019年

8 鲍璐璐;TLR4/MyD88/NF-κB信号通路在腹泻型肠易激综合征中的作用及机制研究[D];安徽医科大学;2019年

9 段声梁;烧伤大鼠血清对血管内皮细胞通透性影响[D];安徽医科大学;2019年

10 胡珊珊;IL-6下调腺苷A3受体信号促进胶原性关节炎大鼠Thl7细胞分化的机制研究[D];安徽医科大学;2019年

本文编号：2858265