急性甲基苯丙胺应用对大鼠海马CA3区γ振荡的影响及机制
发布时间：2020-10-28 11:27
背景神经网络振荡是一种节律性神经同步电活动,存在于海马、杏仁核及大脑皮层等多个脑区。其中,海马区gamma(γ,30~80Hz)节律与脑的高级认知功能如学习和记忆密切相关,是神经网络振荡的一种重要的表现形式。急性甲基苯丙胺(Methamphetamine,MA)暴露增加了γ节律,但其细胞内信号通道仍不清楚。目的探讨急性MA应用对离体海马脑片CA3区γ节律的影响及细胞机制。方法1.采用恒温(28℃~32℃)界面灌流系统进行含有混合气体(95%O_2+5%CO_2)和人工脑脊液(ACSF)进行灌流(流速:1.5 ml/min,pH值:7.35~7.45)。2.3-4周龄的雄性SD大鼠,给予水合氯醛(0.3-0.4mL/100g)腹腔注射麻醉后用预冷(0℃)的切片液心脏灌流,直至大鼠四肢均变为透明白色。3.快速取出所需脑组织,然后放入氧饱和的切片脑脊液中,采用LEICA VT1000S振动切片机水平切割脑组织,得到厚度为400μm的海马脑片。4.将脑片转移至记录槽内,用含有混合气体的ACSF(28℃~32℃,3-4ml/min)灌流约1h后,行场电位记录。红藻氨酸受体激动剂(Kainate,KA)用于诱导稳定的γ节律(30~80 Hz)。5.观察MA(20μM)对海马CA3区γ节律的影响。之后,再使用多巴胺受体阻断剂,NMDA受体阻断剂,PI3K、Akt、ERK、PKA等细胞内激酶的抑制剂来探讨急性MA应用对海马神经网络活动作用的细胞机制。记录数据通过Spike 2软件进行分析,统计结果以平均值±标准差的方式表示。使用Sigmastat软件作统计分析,若P≤0.05,则认为具有统计学意义。结果1.MA对大鼠海马CA3区γ节律的调节具有明显增加作用。2.PI3K的抑制剂Wortmannin(0.2μM)不能阻断MA对海马γ节律增加作用。3.ERK阻断剂U0126(2.5μM)、PKA阻断剂H89不能阻断MA对海马γ节律增加作用。4.D1受体部分阻断了MA对海马γ节律的增加作用、D2受体完全阻断了MA对海马γ节律的增加作用、NMDA受体阻断剂D-AP5则逆转了MA对海马γ节律的增加作用。5.Akt的抑制剂Tricribine(5μM)阻断了MA对海马γ节律的增强作用。结论MA对海马CA3区γ节律具有明显的增强作用;其增强机制与D2R、NMDA受体及Akt信号分子的激活相关。
【学位单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R741
【部分图文】：
新乡医学院硕士学位论文2 结果2.1 MA 增强了 KA 诱导的γ节律使用 200nM KA 灌流离体海马脑片，诱导出γ节律，达到稳态后（50-120min），给予浓度为 20μM 的MA持续灌流约 30min，发现 MA增强了γ节律的能谱(图1B)，当洗掉 MA 后，γ节律的能谱可以部分或者完全恢复(图 1C)，统计学分析表明，MA 导致的增强具有显著性意义(260.9±10.2% ，与对照组比较，***P<0.001，paired T-test，n=12)。上述结果表明了 MA 明显增加了 KA 诱导的γ节律。
新乡医学院硕士学位论文阻断剂）、Raclopride（DR2/3/4 阻断剂）自身的γ节律的调节作用以及对 MA 作用的影响。应用含有浓度为 10μM SCH23390 的脑脊液灌流脑片，发现γ节律功率谱轻度增加(18.9±4.1%，*P<0.05，paired T-test，n=11，图 2 A-C)，再加入 20μM MA后，γ节律的功率谱无明显改变（8.4±4.4%，与 SCH23390 相比，P>0.05，pairedT-test ， n=11 ， 图 2 A-C) 。 与 20μM MA 单 独 作 用 (260.9±10.2%) 相 比 ，SCH23390+MA 对γ节律的作用（32.6±4.6%)具有显著性差异(P<0.05，T-test) 这些结果表明：DR1 阻断剂部分阻断了 MA 的作用。
新乡医学院硕士学位论文2.3 D2/3/4 阻断剂 Raclopride 对 MA 增强γ节作用的影响应用含有浓度为 10μM Raclopride 的脑脊液灌流脑片,对γ节律功率谱没有明显影响(103±8.6%,与对照组相比，P >0.05，paired T-test，n=6，图 3A-C)。进一步加入20μM MA，γ节律的能谱显示了轻度降低，但没有显著性差异(91.1±21%，与对照组相比，P >0.05， paired T-test，n=6，图 3A-C)。这些结果表明：DR2 阻断剂完全阻断了 MA 的作用，说明 MA 对γ节律的增强作用主要涉及到 DR2 的激活。
【参考文献】
本文编号：2860028
【学位单位】：新乡医学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R741
【部分图文】：
新乡医学院硕士学位论文2 结果2.1 MA 增强了 KA 诱导的γ节律使用 200nM KA 灌流离体海马脑片，诱导出γ节律，达到稳态后（50-120min），给予浓度为 20μM 的MA持续灌流约 30min，发现 MA增强了γ节律的能谱(图1B)，当洗掉 MA 后，γ节律的能谱可以部分或者完全恢复(图 1C)，统计学分析表明，MA 导致的增强具有显著性意义(260.9±10.2% ，与对照组比较，***P<0.001，paired T-test，n=12)。上述结果表明了 MA 明显增加了 KA 诱导的γ节律。
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新乡医学院硕士学位论文2.3 D2/3/4 阻断剂 Raclopride 对 MA 增强γ节作用的影响应用含有浓度为 10μM Raclopride 的脑脊液灌流脑片,对γ节律功率谱没有明显影响(103±8.6%,与对照组相比，P >0.05，paired T-test，n=6，图 3A-C)。进一步加入20μM MA，γ节律的能谱显示了轻度降低，但没有显著性差异(91.1±21%，与对照组相比，P >0.05， paired T-test，n=6，图 3A-C)。这些结果表明：DR2 阻断剂完全阻断了 MA 的作用，说明 MA 对γ节律的增强作用主要涉及到 DR2 的激活。
【参考文献】
相关期刊论文 前1条
1 杨黎华;白洁;;单胺类神经递质在药物成瘾中的作用机制[J];中国药理学通报;2015年02期
本文编号：2860028
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