米诺环素在神经退行疾病小鼠模型中对神经元流失的影响

发布时间：2017-04-05 03:02

  本文关键词：米诺环素在神经退行疾病小鼠模型中对神经元流失的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：米诺环素(Minocycline)是一种广谱的四环素类抗生素。很多的临床医学研究已经证实,在多种神经相关疾病的动物模型中,米诺环素具有一定的神经保护作用。然而,目前未知米诺环素是否能够影响到神经退行疾病模型中的神经元流失现象。为了系统地检测米诺环素对神经元流失的影响,本项目使用米诺环素在出现年龄依赖性神经元流失的Dicer条件性敲除(Dicer conditional knockout,Dicer cKO)的小鼠模型中。首先,检测Dicer cKO小鼠出现神经炎症反应和神经元流失开始发生的时间点,在Dicer cKO小鼠出现神经炎症反应与神经元流失现象出现之前,连续使用米诺环素治疗Dicer cKO小鼠两个月。在治疗后,检测治疗组与对照组中神经炎症反应的相关特异性蛋白,包括胶质细胞纤维素酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP),钙离子结合体分子1(Ionized calcium-binding adapter molecule 1,Iba1)和白介素6(Interleukin 6,IL6),在治疗组Dicer c KO小鼠的大脑中蛋白表达量显著减少,说明米诺环素能够抑制神经炎症反应。然而,检测神经细胞核蛋白(Neuronal nuclear,NeuN)、突触小泡蛋白(Synaptophysin,SYP)和突触后膜蛋白(Postsynaptic Density protein 95,PSD95),以及检测神经元细胞凋亡,发现神经元的流失和凋亡细胞的数目并没有受到药物的影响,说明米诺环素不能抑制神经元流失现象。在Dicer cKO小鼠的大脑皮层中,出现微管相关蛋白质Tau的过度磷酸化现象,而米诺环素治疗后的Dicer cKO小鼠中的Tau蛋白的过度磷酸化现象并未显著改变,检测Tau蛋白的相关激酶,如促细胞分裂素蛋白p44/42(Mitogen-activated protein kinases p44/42,MAPK p44/42 or Erk1/2)、糖原合成酶激酶3(Glycogen synthase kinase 3,Gsk3)和蛋白激酶B(Protein kinase B,Akt),激酶的活性没有受到影响,说明米诺环素不能抑制Tau蛋白相关激酶的活性,从而不能改变Dicer cKO小鼠的Tau的过度磷酸化现象。因此,米诺环素能够抑制神经炎症反应,不能抑制神经元的流失和凋亡。
【关键词】：米诺环素 Dicer cKO 神经炎症反应 神经元流失
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R741;R-332
【目录】：

• 摘要3-4
• Abstract4-10
• 第1章 引言10-21
• 1 神经退行疾病10-13
• 1.1 神经退行疾病的研究进展10
• 1.2 神经退行疾病的功能紊乱10-11
• 1.3 神经退行疾病的细胞内病理机制11-13
• 1.4 神经退行疾病与年龄13
• 1.5 治疗13
• 2 神经炎症反应13-17
• 2.1 神经炎症反应的诱因14
• 2.2 中枢神经系统免疫应答14-16
• 2.3 神经炎症与神经退行疾病16-17
• 2.4 作为治疗靶点的研究17
• 3 米诺环素17-18
• 4 Cre-Flox P简介18
• 5 CaMK II-Cre简介18
• 6 Dicer基因及蛋白简介18-19
• 7 课题研究的来源、目的及意义19-21
• 7.1 课题来源19
• 7.2 研究的目的和意义19-21
• 第2章 Dicer cKO 2 月龄小鼠的大脑形态21-33
• 1 材料和设备21-23
• 1.1 实验动物21
• 1.2 试剂21-22
• 1.3 抗体22
• 1.4 设备22-23
• 1.5 溶液配制23
• 2 实验方法23-28
• 2.1 动物模型繁殖和编号23-24
• 2.2 小鼠基因型鉴定和分组24-25
• 2.3 小鼠大脑的解剖取样25
• 2.4 小鼠大脑石蜡固定包埋、切片25-26
• 2.5 尼氏小体染色（Nissl染色）实验26
• 2.6 组织免疫化学实验26-28
• 2.7 组织免疫荧光实验28
• 3 结果和分析28-32
• 3.1 Dicer cKO小鼠的基因型鉴定结果和实验小鼠分组28-29
• 3.2 Nissl染色结果29-30
• 3.3 成熟神经元的检测30
• 3.4 新激活神经胶质细胞测定30
• 3.5 突触和细胞微管骨架形态组织免疫荧光染色30-31
• 3.6 神经炎症反应和神经元死亡开始发生时间测定结果31-32
• 4 小结32-33
• 第3章 米诺环素对Dicer cKO小鼠神经炎症反应的影响33-43
• 1 材料和设备33-37
• 1.1 实验动物33
• 1.2 试剂33
• 1.3 抗体33-34
• 1.4 设备34
• 1.5 溶液配制34-37
• 2 实验方法37-39
• 2.1 动物模型繁殖和编号37
• 2.2 小鼠基因型鉴定和分组37
• 2.3 小鼠大脑的解剖取样37
• 2.4 小鼠大脑石蜡固定包埋、切片37
• 2.5 小鼠大脑皮质总蛋白提取实验37-38
• 2.6 蛋白浓度测定38
• 2.7 组织免疫化学实验38
• 2.8 蛋白免疫印迹（Western Blot, WB）实验38-39
• 3 结果和分析39-41
• 3.1 米诺环素对神经炎症反应的影响检测结果39-40
• 3.2 米诺环素对神经免疫反应的影响40-41
• 4 小结41-43
• 第4章 米诺环素对Dicer cKO小鼠神经元退行的影响43-50
• 1 材料和设备43-47
• 1.1 实验动物43
• 1.2 试剂43
• 1.3 抗体43
• 1.4 设备43-44
• 1.5 溶液配制44-47
• 2 实验方法47
• 2.1 动物模型繁殖和编号47
• 2.2 小鼠基因型鉴定和分组47
• 2.3 小鼠大脑的解剖取样47
• 2.4 小鼠大脑石蜡固定包埋、切片47
• 2.5 小鼠大脑皮质总蛋白提取实验47
• 2.6 蛋白浓度测定47
• 2.7 组织免疫化学实验47
• 2.8 蛋白免疫印迹（Western Blot, WB）实验47
• 3 结果和分析47-49
• 3.1 米诺环素对Dicer cKO小鼠神经退行的影响47-49
• 4 小结49-50
• 第5章 米诺环素对Dicer cKO小鼠突触影响50-58
• 1 材料和设备50-54
• 1.1 实验动物50
• 1.2 试剂50
• 1.3 抗体50-51
• 1.4 设备51
• 1.5 溶液配制51-54
• 2 实验方法54-55
• 2.1 动物模型繁殖和编号54
• 2.2 小鼠基因型鉴定和分组54
• 2.3 小鼠大脑的解剖取样54
• 2.4 小鼠大脑石蜡固定包埋、切片54
• 2.5 小鼠大脑皮质总蛋白提取实验54
• 2.6 蛋白浓度测定54
• 2.7 组织免疫荧光实验54
• 2.8 蛋白免疫印迹（Western Blot, WB）实验54-55
• 3 结果和分析55-57
• 3.1 米诺环素对神经突触的影响检测结果55
• 3.2 米诺环素对神经树突的影响检测结果55-57
• 4 小结57-58
• 第6章 米诺环素对Dicer cKO小鼠神经凋亡影响58-63
• 1 材料和设备58-60
• 1.1 实验动物58
• 1.2 试剂58
• 1.3 设备58-60
• 2 实验方法60-61
• 2.1 动物模型繁殖和编号60
• 2.2 小鼠基因型鉴定和分组60
• 2.3 小鼠大脑的解剖取样60
• 2.4 小鼠大脑石蜡固定包埋、切片60
• 2.5 凋亡细胞检测实验60-61
• 3 结果和分析61
• 3.1 米诺环素对神经元凋亡的影响检测结果61
• 4 小结61-63
• 第7章 米诺环素对Dicer cKO小鼠Tau过度磷酸化影响63-71
• 1 材料和设备63-66
• 1.1 实验动物63
• 1.2 试剂63
• 1.3 抗体63-64
• 1.4 设备64
• 1.5 溶液配制64-66
• 2 实验方法66-67
• 2.1 动物模型繁殖和编号66-67
• 2.2 小鼠基因型鉴定和分组67
• 2.3 小鼠大脑的解剖取样67
• 2.4 小鼠大脑皮质总蛋白提取实验67
• 2.5 蛋白浓度测定67
• 2.6 蛋白免疫印迹（Western Blot, WB）实验67
• 3 结果和分析67-68
• 3.1 米诺环素对Tau磷酸化的的影响检测结果67
• 3.2 米诺环素对Tau的磷酸化激酶的影响检测结果67-68
• 4 小结68-71
• 第8章 研究结论与展望71-73
• 1 结论71-72
• 2 研究展望72-73
• 致谢73-74
• 参考文献74-79
• 攻读学位期间的研究成果79

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