AC142119.1调控MYCN启动子区组蛋白甲基化促进神经母细胞瘤增殖的机制研究

发布时间：2020-11-03 15:31

　　 目的:神经母细胞瘤(NB)MYCN扩增与其快速进展密切相关,但促发MYCN扩增机制尚未完全明确。本文以与MYCN位置邻近的长链非编码基因(Long noncoding RNA,LncRNA)为切入点,从细胞生物学功能角度明确AC142119.1对NB细胞生长、增殖等的影响;从分子机制水平初步探索AC142119.1调控MYCN启动子区组蛋白甲基化的具体分子机制。方法:借助LncRNA表达谱芯片检测MYCN扩增和非扩增NB细胞系中差异表达LncRNAs,Real-time PCR和Western blot检测NB细胞系中AC142119.1与MYCN的表达,沉默和过表达AC142119.1后Real-time PCR和Western blot分析AC142119.1与MYCN的表达变化;CCK-8、ki-67免疫荧光、细胞周期实验检测AC142119.1对NB细胞增殖的影响;FISH和胞质胞核分离实验对AC142119.1进行定位,cat RAPID网站预测AC142119.1与组蛋白甲基化转移酶结合能力,Ch IP-PCR检测AC142119.1对MYCN启动子区域组蛋白甲基化的调控作用。结果:根据基因芯片结果和生物信息学分析找到与MYCN位置邻近差异倍数最大的LncRNA-AC142119.1,AC142119.1在MYCN高表达NB细胞系中的表达水平显著高于MYCN低表达的NB细胞系,沉默和过表达AC142119.1后分别导致MYCN的表达下降和增加;CCK-8、ki-67实验表明AC142119.1可以促进细胞增殖,细胞周期实验证明AC142119.1可以减少细胞S期阻滞;FISH与胞质胞核实验结果均表明AC142119.1定位于细胞核;catRAPID结果表明AC142119.1可能与组蛋白甲基化转移酶结合,CHIP-PCR证实沉默AC142119.1可以减少MYCN启动子区组蛋白3赖氨酸27甲基化(H3K27me3)活性。结论:与MYCN位置邻近的LncRNA-AC142119.1在MYCN高表达的NB细胞中高表达,并促进NB细胞增殖,同时AC142119.1可以调控MYCN表达,其机制可能与调控MYCN启动子区域组蛋白甲基化有关。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R739.4
【部分图文】：

16图 1.1：MYCN 扩增和非扩增的 NB 细胞系中 LncRNA 表达谱差gure 1.1: Different LncRNA expression profiles between the MYCN-and non-amplified NB cell lines片结果验证择 6 个差异表达的 LncRNAs，通过 Real-time PCR 分别在细胞中验证其表达，结果与基因芯片结果一致（图 1.2）。说

图 1.2：基因表达谱芯片的验证 1.2: Validation of LncRNA microarray data by Rea分析与 MYCN 位置邻近的差异 LncRN片，与 MYCN（chr2: 15940438-15947007）位RNAs 中有 3 个（表 1.1），其中差异倍数:16096426-16105662) 位于 MYCN 上游（图 1.53bp，有 4 个外显子和 3 个内含子，确切功能由于其在细胞中的丰度较低，所以没有纳入我表 1.1：与 MYCN 位置邻近的差异表达 LncRN1: Differential expressed LncRNAs which located ne

Real-time PCR 和 WB 检测 MYCN mRNA 和蛋白在 NB 细胞的表达水平Real-time PCR 检测在 SH-SY5Y、SK-N-AS、SK-N-DZ 和 SK-N-BE(2) 细CN mRNA 的表达水平。与 SH-SY5Y 细胞相比，MYCN mRNA 在 SK-K-N-BE(2)细胞中的表达均增高 100 余倍（P<0.01），而在 SK-N-AS 细胞无显著差异（P >0.05）（图 1.4A）。WB 检测 MYCN 蛋白在 NB 细胞中的表达。与 SH-SY5Y 细胞相比，MYC SK-N-DZ 和 SK-N-BE(2) 细胞中的表达均增高 50 多倍（P<0.01），N-AS 细胞中的表达无显著差异（P >0.05）（图 1.4 B）。以上结果表明 MK-N-DZ和SK-N-BE(2)细胞中高表达，在SH-SY5Y和SK-N-AS细胞中低
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本文编号：2868764